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课件网) 2.3 分解纤维素的微生物的分离 植物细胞壁 利用微生物的纤维素酶可利用秸秆产酒精。 食草动物消化道中共生着能够分解纤维素的细菌。 被土壤中的微生物分解 农作物秸秆的米秸、麦秸、稻草、草、木屑等富含大量的纤维素，被利用的机会很少、效率低； 纤维素生物燃料：最有希望替代石油能源 。 （一）纤维素和纤维素酶 1、纤维素 一种葡萄糖首尾相连而成的高分子化合物，可以作为微生物分解菌的碳源。 2. 纤维素酶 土壤中某些微生物能够产生_____,把纤维素分解为葡萄糖后再利用。 纤维素酶 纤维二糖 C1酶、Cx酶 葡萄糖苷酶 葡萄糖 纤维素 纤维素酶（复合酶） ①取二支20mL的试管 ②各加入一张滤纸条 ③各加入pH4.8，物质量为0.1mol/L的醋酸－醋酸钠缓冲液11ml和10ml ④在乙试管中加入1mL纤维素酶 ⑤两支试管固定在锥形瓶中，放在 140r/min的摇床上振荡1h ⑥结果：乙试管的滤纸条消失 甲 乙 讨论： 乙试管的滤纸条为什么会消失？甲试管的作用是什么？ 滤纸崩溃法 刚果红染色法 （二）纤维素分解菌的筛选 2、原理： 1、方法： 即：可根据是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。 红色复合物 红色消失，出现透明圈 纤维素 刚果红 （染料） 纤维素分解菌 纤维素酶 二、实 验 设 计 土壤取样 选择培养 梯度稀释 将样品涂布在鉴别纤 维素分解菌的培养基上 挑选产生透明圈的菌落（筛选） (1)分布环境: 1、土壤取样： 富含纤维素的环境中(3-8cm) 在富含纤维素的环境中纤维素分解菌的含量相对提高，获得目的微生物的几率要高于普通环境。 (2)原因: 因此，选择纤维素丰富的环境，如树林中多年落叶形成的腐殖土，多年积累的枯枝败叶等等。 1. 如果找不到合适的环境，怎么办？ 2.将滤纸埋在土壤中有什么作用？ 你认为滤纸应该埋在土壤中多深？ 可以将滤纸埋在土壤中 人工设置纤维素分解菌生存的适宜环境，能使纤维素分解菌相对集中 一般应将滤纸埋于深约10cm左右的土壤中,经过30d左右，再从已腐烂的滤纸上筛选纤维素分解菌。 扩大培养，增加纤维素分解菌的浓度，以确保能够从样品中分离所需要的微生物。 （1）目的： 组分 含量/g 提供的主要营养 纤维素粉 5 NaNO3 1 Na2HPO4.7H2O 1.2 KH2PO4 0.9 MgSO4.7H2O 0.5 KCl 0.5 酵母膏 0.5 水解酪素 0.5 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL 2、选择培养 碳源、能源 无机盐、调节PH 特殊营养物质 氮源 若设置一个对照实验说明选择培养的作用，应控制的自变量是将_____改为_____或 与之对照。 （2）你能否设计一个对照实验，说明选择培养基的作用？ 葡萄糖 纤维素粉 纤维素 牛肉膏蛋白胨培养基 （4）将土样加入装有30ml选择培养基的锥形瓶中，将锥形瓶固定在摇床上，在一定温度下振荡培养1～2天，直至培养液变浑浊。也可重复选择培养。 振荡培养有利于微生物与空气充分接触，同时也有助于充分利用培养液中的营养物质 注意：该步骤也可省略，但纤维素分解菌较少。 按照课题1的稀释操作方法，将选择培养后的培养基进行等比稀释101～107倍。 3.梯度稀释 101 102 103 104 105 106 组分 含量 提供的主要营养 CMC－Na 5～10 g 酵母膏 1 g KH2PO4 0.25 g 琼脂 15 g 土豆汁 100 mL 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1 000 mL 固体培养基 在其中加入刚果红可形成以纤维素分解菌为中心的透明圈，据此可鉴别并筛选到纤维素分解菌。--鉴别培养基 (水溶性羧甲基纤维素钠) 4.将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培养基上 (1)制备鉴别培养基: 碳源 主要作氮源 无机盐 凝固剂 碳源 空白的刚果红培养基 纤维素分解菌在刚果红培养基上形成的透明带 （2）刚果红染色法 方法一：先 ， 再加入刚果红进行颜色反应。 方法二：在 时就加入刚果红 ... ...
