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课件网) 专题2 细胞工程 动物细胞融合与单克隆抗体 杂种植株 融合的原生质体AB 再生出细胞壁 脱分化 愈伤组织 再分化 植物细胞的融合 植物组织培养 植物细胞A 原生质体B 原生质体A 杂种细胞AB 去 壁 去 壁 人 工 诱 导 促进融合的方法？ 融合完成的 标志？ 植物细胞B 方法？ 纤维素酶果胶酶 物理：离心、振动、电刺激 化学：聚乙二醇 再生细胞壁 筛选 1.概念： 2.结果： 3.原理： 4.诱导方式 指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程（细胞杂交）。 形成具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞 细胞膜的流动性 物理法：离心、振动、电激 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活的病毒 一、动物细胞融合 5.意义： 突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。 6.应用： 成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段；特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体 灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面 细胞膜被病毒颗粒穿通 细胞膜连接 细胞融合，形成杂交细胞 （细胞膜具有一定的流动性） 细胞核 病毒颗粒 细胞核 用灭活的病毒诱导动物细胞融合过程 比较项目 植物体细胞杂交 动物细胞融合 原理 融合前处理 促融方法 意义和用途 克服远缘杂交不亲和的障碍; 获得杂种植株 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性 细胞的全能性 用纤维素酶、 果胶酶去壁 用酶使细胞分散开来 物理（离心、振荡、电激） 化学（聚乙二醇） 物理、化学方法（同左） 灭活的病毒 最主要的用途是制备单克隆抗体 克服远缘杂交不亲和的障碍； 单 单个细胞 克隆 无性生殖 抗体 免疫球蛋白 二、单克隆抗体 抗原（细菌） 吞噬细胞 T细胞（分泌淋巴因子） B细胞 （识别） 效应B细胞（浆细胞） 记忆细胞 抗体 抗体抗原特异性结合 吞噬细胞消化 增殖 分化 二次免疫反应 （摄取处理） 呈递 传统的抗体的生产方法及缺陷是什么？ 产量低、纯度低；而且制备抗体特异性差。 抗原 动物体内 刺激 浆细胞 抗体 抗体不纯 筛选单一浆细胞 不能增殖产生大量抗体 注射 a b c 抗原决定簇 Ba Bb Bc 抗体a 抗体b 抗体c 一种抗原刺激，机体会产生许多B 淋巴细胞，因为某一种抗原会有许多抗原决定簇，这些B淋巴细胞产生的分别是针对同一抗原的不同抗原决定簇的抗体，即不同的B淋巴细胞产生的抗体不同，产生特异性抗体种类可达百万种以上。 每一个Ｂ淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 现在，我们想要获得大量的抗体c，必须克隆Bc，并形成细胞群。遗憾的是，在体外培养条件下，一个B淋巴细胞是不可能无限增殖的，怎么办呢？ 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞）能无限增殖 杂种细胞 动物细胞培养技术 动物细胞融合 单克隆抗体 既能产生特异性抗体，又能大量繁殖 创始人：米尔斯坦 动物细胞融合技术 BB 、杂交瘤 、瘤瘤 、 未融合细胞、融合的具有同种核细胞死亡；只有杂种瘤细胞才能活 克隆化培养 （动物细胞培养） 获得产生相应抗体的B淋巴细胞 第1次筛选 第2次筛选 选出能产生专一抗体（针对某一抗原决定簇）的杂交瘤细胞 第一次筛选得到的杂交瘤细胞有Ba-瘤、Bb-瘤、Bc-瘤等，而我们想得到的是能分泌抗体c的Bc-瘤，必须再筛选一次，将不同的杂交细胞分开，用多孔培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过克隆化培养，使每孔的细胞数目增多，并且用特定的抗原检测，选出能产生专一抗体c的杂交瘤细胞。这个过程包括克隆化培养和抗体检测。 单克隆抗体 制备过程 二、动物细胞工程 单克隆抗体的制备 抗原注入小鼠体内 骨髓瘤细胞 分离 B淋巴细胞 杂瘤细胞 细胞融合、选择性培养基筛选 细胞培养 选择培养细胞 注入腹腔小鼠 体内培养 培养基 体外培养 从腹水提取 从培养 ... ...
