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课件网) 基因工程的基本 操作程序（2） 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 基因工程的基本操作程序 导学 指出基因表达载体的组成及其功能； 2.列举将目的基因导入植物细胞方法 3.农杆菌转化法的原理及作用 思 前思:(7min)结合以下问题请学生及课本第11-13页，并注意勾、圈、画、点、记 。 后思:(8min)请学生快速的关注导学案上的学习目标与重难点，准确、快速答题并认真记录疑惑。 指出基因表达载体的组成及其功能； 2.列举将目的基因导入植物细胞方法 3.农杆菌转化法的原理及作用 议 议 议 议 1.该基因工程中的目的基因和载体分别是什么 一般情况下,为什么要用同一种限制酶处理目的基因和载体 2.该实例中,采用何种方法导入目的基因 为什么目的基因可以整合到染色体的DNA上 目的基因是Bt毒蛋白基因,载体是Ti质粒。用同一种限制酶处理目的基因和载体,可以获得相同的黏性末端,便于构建基因表达载体 采用的方法是农杆菌转化法,由于T质粒上的T一DNA可转移到受体细胞且能整合到受体细胞的染色体DNA上,而目的基因又插入到了T一DNA上,所以目的基因可以整合到受体细胞的染色体 展 要求：普通话、大声、规范、迅速 基因工程的基本操作程序 1.获取目的基因 2.构建表达载体 3.导入受体细胞 4.目的基因检测与鉴定 核心步骤 二、基因表达载体的构建 1、基因表达载体构建的目的 使目的基因在受体细胞中稳定存在，可以遗传给下一代； 使目的基因能够表达和发挥作用。 目的基因是一个DNA片段，没有复制原点，不含启动子、终止子 二、基因表达载体的构建 2、基因表达载体的组成 启动子＋目的基因＋终止子＋标记基因 功能：终止转录 目的基因 启动子 位置：基因的首端 功能：是RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录出mRNA 终止子 位置：基因的末端 标记基因：鉴别受体细胞中是否含有目的基因(一般为抗生素抗性基因或荧光蛋白基因) 复制原点：使目的基因复制和传递 启动(终止)转录 启动(终止)翻译 作用 位于DNA上 位于mRNA上 位置 DNA片段 三个相邻碱基 本质 启动(终止)子 起始(终止)密码子 启动子和起始密码子、终止子和终止密码子的区别 知识归类 二、基因表达载体的构建 3、基因表达载体构建的过程 一般用同一种限制酶分别切割载体和含有目的基因的DNA片段，再用DNA连接酶将两者连接。 形成一个重组质粒会形成多少个磷酸二酯键？ 四个 注意： ①载体与表达载体的区别：二者都有标记基因和复制原点两部分DNA片段。表达载体在载体基础上增加了目的基因、启动子、终止子三部分结构。 ②用到的工具酶：既用到限制酶切割载体，又用到DNA连接酶将目的基因和载体拼接，两种酶作用的化学键都是磷酸二酯键。 ③启动子、终止子对于目的基因表达必不可少。 ④目的基因不能单独进入受体细胞，必需以表达载体的方式携带进去。 1、转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内稳定存在和表达的过程。 2、转化的方法 (1)导入植物细胞 受体细胞的种类：体细胞 ①农杆菌转化法 ②基因枪法 ③花粉管通道法 (采用最多) 导入方法 三、将目的基因导入受体细胞 优点：经济而有效 (1)导入植物细胞 ①农杆菌转化法（采用最多） a.农杆菌的特点： 农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下感染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有感染能力。 当植物体受到损伤时，伤口处的细胞会分泌大量酚类化合物，吸引农杆菌移向这些细胞，这时农杆菌中的Ti质粒上的T-DNA可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体DNA上。 三、将目的基因导入受体细胞 b.方法步骤： 插入Ti质粒的 上→转入 →导入植物细胞→目的基因插入植物细胞 ... ...
