课件24张PPT。实验1 大肠杆菌的培养和分离 指结构简单,形体微小的单细胞、多细胞或无细胞结构的低等生物。 一、微生物微生物的类群（1）结构： （2）繁殖方式： （3）变异类型： （4）应用：1、细菌：拟核区基因突变、基因重组基因工程、遗传实验材料（1）概念： （2）作用：2、菌落：鉴定菌种3、培养基：（1）类型：按物理性质分液体培养基固体培养基凝固剂 琼脂扩大培养，工业生产分离纯化，鉴定菌种，计数，保藏LB培养基 营养培养基天然培养基 合成培养基3、培养基：（2）成分及其作用：二、无菌操作1、概念： 无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止杂菌污染的方法。2、无菌操作包括： （1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行 清洁和消毒 ； （2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行 灭菌 ； （3）为避免周围微生物污染，实验操作应在 酒精灯火焰附近 旁进行； （4）避免已灭菌处理的材料用具与 周围物品 相接触。（1）消毒： 利用化学或物理方法，杀死大部份致病微生物的过程；不能杀死芽孢和孢子。3、消毒与灭菌的概念及两者的区别 （2）灭菌： 以化学或物理方法消灭所有微生物，包括所有细菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌的过程。3.常用的消毒与灭菌的方法：（1）消毒法： A、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min B、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃下煮15min（牛奶） C、化学药剂消毒法:用70%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源 D、紫外线消毒（空气）（2）常用灭菌的方法：高压蒸汽灭菌： 培养基、无菌水、各种耐高温的玻璃金属器具高压蒸汽灭菌锅 1kg/cm2、121℃下维持15min酒精灯灼烧灭菌： 接种环等金属器具1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。思考三、分离细菌方法1、划线分离法 1）灼烧接种环； 2）接种环冷却后，蘸取带菌培养物 3）在近火焰处，让带菌接种环在固体培养 基上划线。 2、涂布分离法1) 稀释菌液 （10-5 ~ 10-7倍） 用无菌吸管吸取1ml细菌培养液加入另一个盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此制成10-1倍的稀释液。 2) 涂布 用无菌吸管取0.1ml稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养基上。再将玻璃刮刀放在酒精灯火焰上灼烧，待刮刀冷却后，在酒精灯旁打开培养皿，将菌液涂布到整个平面上。 3) 培养 ： 将培养皿倒置，在37℃恒温箱中培养24~48h。 划线分离：方法简单，但单菌落较难分开。 涂布分离：单菌落更易分开，但操作复杂。四、大肠杆菌的培养和分离 1、大肠杆菌 （1）特性： 革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌 （2）用途： 基因工程技术中被广泛采用的工具 2、培养： LB液体培养基 ——— 扩大培养 LB液体培养基 ——— 分离3、分离培养基灭菌将LB液体和固体培养基及培养皿高压蒸汽灭菌将灭菌后冷却到60℃的LB固体培养基倒入灭菌过的培养皿中，制作平面培养基.将大肠杆菌从斜面接种到LB液体培养基中，然后在37℃摇床中震荡培养12h。用接种环取震荡培养后的菌液，并在固体培养基上划线，然后将划线后的培养皿倒置与37℃的恒温培养箱中培养12~24h，观察划线末端的菌落生长情况.用接种环取单菌落，用划线法接种于斜面上，在37℃的恒温培养箱中培养24h，再放入4℃的冰箱中保存 。 1.培养基灭菌后，需要冷却到60 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？思考 可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时， ... ...
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