第2课时 基因工程的原理和技术 目标导航 1.简述基因工程的原理。2.描述基因工程操作的几个步骤。3.举例说出筛选含有目的基因的受体细胞的原理。 一、基因工程的基本原理 1．基本原理：让人们感兴趣的基因(_____)在_____中稳定和高效表达。 2．基因工程的基本要素：多种_____、_____、_____和_____等。 二、基因工程的基本操作步骤 1．获得目的基因 (1)目的基因：人们所_____，如人的胰岛素基因、植物的抗病基因等。 (2)获取方法 ①如果目的基因的序列是已知的，可用_____合成目的基因，或者用_____(PCR)扩增目的基因。 ②如果目的基因的核苷酸序列是未知的，可以从_____中获取。 2．形成重组DNA分子 用_____的限制性核酸内切酶分别 出卷网切割目的基因和载体DNA(如质粒)，使其产生相同的_____，然后用_____将两者连接在一起，形成_____。 3．将重组DNA分子导入受体细胞 (1)常用的受体细胞：_____、枯草杆菌、_____和动植物细胞等。 (2)导入方法举例：用质粒作为载体，宿主细 出卷网胞应该选择_____，用_____处理大肠杆菌，增加其细胞壁的_____，使含有目的基因的重组质粒进入大肠杆菌宿主细胞。 4．筛选含有目的基因的受体细胞 (1)筛选原因：不是所有细胞都接纳了_____。 (2)筛选方法举例：由于质粒上有抗生素抗性 出卷网基因如_____，所以含有这种重组质粒的受体细胞能够在_____的培养基中生长，而没有接纳重组DNA分子的细胞则不能在这种培养基上生长。经过培养，_____能够和质粒一起在宿主细胞内大量_____。 5．目的基因的表达：目的基因在_____中表达，产生人们需要的_____。 知识点一 获得目的基因的方法 1．下列属于获得目的基因方法的是( ) ①利用mRNA反转录形成 ②从基因文库中提取 ③从受体细胞中提取 ④利用PCR技术 ⑤利用DNA转录 ⑥人工合成 A．①②③⑤ B．①②⑤⑥ C．①②③④ D．①②④⑥ 2．下列属于PCR技术所需条件的是( ) ①单链的核苷酸序列引物 ②目的基因所在的DNA片段 ③脱氧核苷酸 ④核糖核苷酸 ⑤DNA连接酶 ⑥DNA聚合酶 ⑦DNA限制酶 A．①②③⑤ B．①②③⑥ C．①②③⑤⑦ D．①②④⑤⑦ 知识点二 形成重组DNA分子和导入受体细胞 3．要想将目的基因插入作为载体的质粒中，在操作中应选用( ) A．DNA连接酶 B．同一种限制性核酸内切酶和DNA连接酶 C．限制性核酸内切酶 D．不同的限制性核酸内切酶和DNA连接酶 4．将ada(腺苷酸脱氨酶基因)通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是( ) A．每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒 B．每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酸识别位点 C．每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada D．每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子 知识点三 筛选含有目的基因的受体细胞和目的基因的表达 5．在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是( ) A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C．将重组DNA分子导入烟草原生质体 D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞 知识点四 基因工程的全过程 6．回答有关基因工程的问题： (1)构建基因工程表达载体 出卷网时，用不同类型的限制酶切割DNA后，可能产生粘性末端，也可能产生_____末端。若要在限制酶切割目的基因和质粒后使其直接进行连接，则应选择能使二者产生_____(相同、不同)粘性末端的限制酶。 (2)利用大肠杆菌生产人胰岛素时，构建的重组DNA含有人胰岛素基因及其启动子等，其中启动子的作用是 _____ _____。 在用表达载体转化大肠杆菌时，常用_ 出卷网_____处理大肠杆菌，以利于表达载体进入；为了检测胰岛素基因是否转录出了mRNA，可用标记的胰岛素基因片段作探针与mRNA ... ...
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