第三部分 第十七章 薄层色谱法 课件(共26张PPT)- 《分析化学实验》同步教学（华中科技大学版）

(课件网) 第三部分 仪器分析实验 第十七章 薄层色谱法 实验一 薄层色谱法测定硅胶（黏合板）的活度 2.了解粘合薄层活度的测定方法。 1.掌握粘合薄层的制备方法。 【实验目的】 硅胶的吸附性质决定于连接在硅原子表面的羟基基团—硅醇基（—Si—OH），经活化后的硅胶如暴露在空气中，则能吸附水分使之减活。 硅胶粘合薄层活度的测定方法，目前一般都采用Stahl活度测定，样品为二甲黄、苏丹红、靛酚蓝等量混合溶液，点在薄层板上，用石油醚展开10cm，斑点应不移动，如用苯展开则应分成三个斑点，合格的硅胶粘合薄层，其Rf值分别为：二甲黄0.58±5%，苏丹红0.38±5%，靛酚蓝0.08±5%，其活度为Ⅱ~Ⅲ级，水分含量5%~15%。如Rf值＜标准值，表明硅胶的含水量小（新鲜活化的硅胶板），吸附能力强，活度级别为＜Ⅱ级，如Rf值＞标准值，表明硅胶的含水量大（暴露在空气中时间较长的硅胶板），吸附能力弱，活度级别为＞Ⅲ级。 硅胶活度级别与硅胶的含水量、吸附能力及样品Rf值的关系如下： 硅胶活度： Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅴ 硅胶含水量： 小 → 大 硅胶吸附能力： 强 → 弱 样品Rf值： 小 → 大 【实验原理】 1．双槽层析缸 2．点样毛细管；电吹风 4．玻璃板（10×20cm）；碾钵 6．硅胶G（薄层层析用）；0.6%羧甲基纤维素钠溶液 8．混合染料（含二甲黄、苏丹红、靛酚蓝各0.40mg/mL） 9．展开剂：石油醚（AR）、甲苯（AR） 【仪器和试剂】 1．硅胶粘合薄层板制备 称取硅胶（薄层层析用）7g，于小碾钵中，加0.5%羧甲基纤维素钠溶液约20mL，碾匀，铺于10×20cm玻璃板上，使形成均匀薄层。室温晾干，置烘箱中于105~110℃活化1h，置干燥器中贮存备用。 2．层析缸饱和 量取石油醚和苯各80mL，分别倒入二只层析缸中，盖上层析缸盖晃动溶液，使其均匀分配至双槽中。 3．点样与展开 取薄层板，在距板一端2cm处用铅笔轻轻划上起始线并在距起始线10cm处划出前沿线。起始线上划4个点样点，每点间隔2cm，两侧点距边缘2cm。用内径0.5mm平口毛细管轻点混合染料溶液，边点边用冷风吹，原点直径应不超过2~3mm。挥干溶剂，将薄层板置于放有苯的层析缸，展开至前沿线时取出，挥干溶剂，划出实际前沿线。另取一板，同上，置于放有石油醚层析缸中，作对照实验。 4．数据处理 观察斑点位置，计算二甲黄、苏丹红、靛酚蓝的Rf值，判断活度。 【实验内容】 【注意事项】 1．点样量不宜太多，否则会造成拖尾，影响分离。 2．展开剂石油醚或甲苯中含水量多少，会影响斑点Rf值，故层析缸须干燥无水。 加入展开剂后如发现混浊，表明展开剂中含水，应用展开剂将层析缸荡洗三次 3．展开剂不要加太多，起始线不能浸入展开剂中，否则会使样点溶解，原点变大 【思考题】 1．影响薄层色谱Rf值的因素有哪些？ 2．用硅胶薄层板分离混合物，是属于哪一种色谱原理？ 实验二 四逆汤中乌头碱的限量检查 【实验目的】 1.掌握薄层色谱的基本操作方法和分离原理、以及薄层色谱斑点的检出识别方法。 2.熟悉薄层色谱对杂质限量检查的方法、薄层色谱斑点比移值Rf的计算方法。 【实验原理】 依据同一成分在相同的色谱条件下应有相同的色谱行为，在一定的色谱条件下，采用对照法，利用与对照品相同的位置有相同颜色的斑点，用以鉴别成分，据此判断样品中的化学组分。 在相同的色谱条件下，色谱斑点的面积大小与组分的质量或含量大小呈正比。因此利用标准对照法，对照品与样品组份的斑点面积之比正比于两者的浓度之比。在杂质限量检查中，要求供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，出现的斑点应小于对照品斑点，或不出现斑点，由此确定杂质限量。 1．层析缸；硅胶G板；毛细管点样器；喷雾器；电吹风； 2．乌头碱对照品；次乌头碱对照 ... ...