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课件网) 总大肠菌群的测定 水处理工艺单元进出水监测 大肠菌群的测定 任务10 （1）整洁、有序、规范；（2）多实践、巧动手，严格执行无菌操作；（3）培养实事求是、严谨认真的科学态度；善于观察、分析问题。 知识目标 素质目标 （1）理解大肠菌群作为水的环境卫生学指标的意义（2）理解大肠菌群的生化特征；（3）掌握多管发酵法测定水样中大肠菌群原理和方法。 能力目标 （1）熟练进行水样稀释、微生物接种的无菌操作；（2）能熟练操作平板分离、革兰氏染色，会MPN查表；（3）能独立完成大肠菌群的测定。 教学目标 主要内容 多管发酵法的原理 2 水中总大肠菌群的测定方法 3 注意事项与思考题 4 总大肠菌群的环境卫生学意义 1 1.1 为什么要检测水体的总大肠菌群 水体的细菌性污染主要来源于人畜粪便，大肠菌群与水中的多数病原菌（如沙门氏菌、志贺氏菌、霍乱弧菌等）存活期相近； 水中病原菌含量少，要从数量巨大的细菌中一一检测出少量病原菌，难以直接检测水体中的病原菌； 大肠菌群与病原菌都主要来自于粪便，大肠菌群分布广泛、数量多，存活时间长，操作简便，容易检出、容易观察。 大肠菌群是水体粪便污染的理想指示生物。 1.2 大肠菌群的环境卫生学意义 只要检测出水样中的总大肠菌群，就可知道该水体被粪便污染的程度，从而间接判断肠道病原菌在水体中在的概率。 霍乱弧菌(×2000) 沙门氏菌 大肠菌群是一群好氧或兼性厌氧，在37℃培养24～48h、能发酵乳糖产酸并产气、革兰氏阴性、无芽孢杆菌； 大肠菌群广泛分布各类水体、易培养、易观察。 1.3 大肠菌群的基本特征 主要内容 大肠菌群及其卫生学意义 1 多管发酵法测大肠菌群的原理 2 水中大肠菌群的测定方法 3 注意事项与思考题 4 根据大肠菌群特性：能发酵乳糖产酸、产气，G-，无芽孢杆菌 2.1 多管发酵法的原理 有大肠菌群？是？ 不产酸不产气 无大肠菌群 有大肠菌群？是？ 24h 产酸不产气 产酸产气 革兰氏染色 阴性 是大肠菌群 24h 37℃ 革兰氏染色 阴性 是大肠菌群 乳糖培养液 发酵呈阳性 水样中大肠菌群数量如何确定？ 多管发酵法用最可能数（Most Probable Number，简称MPN ）来表示试验结果的。利用泊松分布原理，根据发酵阳性管的数量，估计出水样中大肠菌群的最可能数（MPN），再经过证实和确认检测，预测出水样中的总大肠菌群数。 2.1 多管发酵法的原理 实验材料及仪器 1）乳糖蛋白胨培养液（加溴甲酚紫指示液）；紫色—黄色 2）三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液； 3）伊红美蓝培养基（EMB培养基）—深紫色有金属光泽菌落； 4）革兰氏染色剂； 5）显微镜，烧瓶、大试管、发酵小套管、培养皿、移液管、无菌水等。 2.2 多管发酵法检测的准备 1）自来水水样：先将水龙头用火焰烧灼3min灭菌，放掉管中积水5min，再用无菌容器接水样后，立刻送检。 2）地表水水样：将无菌的具塞玻璃瓶瓶口向下，浸入距水面10～15cm深处，翻转瓶子，拔掉玻璃塞，水样流入瓶中后，将瓶塞塞好，再从水中取出后，立刻送检。 2. 水样的采集 主要内容 大肠菌群及其卫生学意义 1 水中大肠菌群的测定方法 3 注意事项与思考题 4 水中大肠菌群的测定 3 多管发酵法测大肠菌群的原理 2 1. 初发酵阶段 1） 取水样300ml分别加入12个发酵瓶：2个含有50ml三倍乳糖发酵烧瓶各加100 ml水样；10个含有5 ml三倍乳糖发酵管各加10 ml水样，混匀。2） 在37℃培养24h至48 h，查看发酵结果。 3.1 生活饮用水的大肠菌群测定 24h产酸产气 48h不产酸产气 存在大肠菌群 三倍乳糖5ml/管 接种水样各100ml 三倍乳糖50ml/管 接种水样各10ml 水样 2. 证实：产酸产气的细菌是G- 将产酸产气的混合液平板划线，接种至伊红美蓝培养皿，培养24h后，选取深紫色有金属光泽 ... ...
