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课件网) 培养 大面积烧伤 人造皮肤 怎样才能获得大量的自体健康皮肤？ 能不能用自体皮肤的单个细胞培养出可供移植的皮肤？ 可以从病人身上取少量正常、健康的皮肤在体外进行培养、扩增。 第2节 动物细胞工程 第2章 细胞工程 选修3《生物技术与工程》 ———动物细胞培养 一、动物细胞培养的问题 1.如何分离出皮肤干细胞？ 2.培养细胞的培养基有哪些要求？ 3.培养细胞的培养箱有哪些要求？ 4.细胞在什么地方生长增殖，有哪些原因限制细胞生长增殖？让细胞生长增殖的措施？ 一、动物细胞培养的问题 1.如何分离出皮肤干细胞？ 机械分离法： 先将样品剁成小碎片，再用破碎机破碎，使细胞分散，最后通过滤网分离细胞。 酶消化法： 血液中的细胞可以采用密度梯度离心。 胶原蛋白 纤连蛋白 层粘蛋白 蛋白聚糖 细胞外间质成分 胰蛋白酶、胶原蛋白酶等 2.培养动物细胞的培养基有哪些要求？ 一、动物细胞培养的问题 物理性质： 常为液体培养基（培养液） 营养成分： 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、 等 由于人们对细胞所需的营养物质还没有完全搞清楚 合成or天然培养基？ 血清 原因 缓冲物质 NaHCO3、Na2HPO4 pH： 多为7.2~7.4 含pH指示剂酚红 成分 蛋白质、氨基酸、葡萄糖、激素及促细胞生长因子、促贴附因子等 一、动物细胞培养的问题 3.培养动物细胞的培养箱有哪些要求？ 通气 动物细胞培养瓶 CO2培养箱 提供CO2： 维持培养液的pH 提供O2： 细胞代谢所必需的（有氧呼吸的反应物） 提供适宜温度： 哺乳动物细胞多为36.5±0.5℃ 95%空气和5% CO2 混合气体 模拟内环境：温度，pH,渗透压 一、动物细胞培养的问题 4.细胞在培养液中如何增殖，有哪些原因限制细胞生长增殖？让细胞生长增殖的措施？ 悬浮型 在培养液中悬浮生长增殖 贴壁型 要贴附于瓶壁才能生长增殖 细胞贴壁的过程 增殖方式： 有丝分裂 多数细胞 细胞贴壁： 要求：培养瓶或培养皿的内表面光滑，便于贴附。 细胞贴附于瓶壁的现象 一、动物细胞培养的问题 细胞密度过大，培养中营养物质缺乏，有害代谢物积累。 贴壁细胞还会发生接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。 4.细胞在什么地方生长增殖，有哪些原因限制细胞生长增殖？让细胞生长增殖的措施？ 一、动物细胞培养的问题 分瓶后的细胞培养。 4.细胞在什么地方生长增殖，有哪些原因限制细胞生长增殖？让细胞生长增殖的措施？ 悬浮型细胞 贴壁型细胞 离心 细胞悬液 细胞 加培养液 分瓶培养 胰蛋白酶 分散的细胞 胶原蛋白酶 离心 细胞悬液 细胞 加培养液 分瓶培养 分瓶之前的细胞培养（即动物组织经处理后的初次培养）。 传代培养： 原代培养： 二、动物细胞培养的过程 二、动物细胞培养的过程 取动物组织 制成细胞悬液 原代培养 放入CO2培养箱中培养 放入CO2培养箱中培养 转入培养液中进行 传代培养 用机械的方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理的方法，将组织分散成单个细胞 从动物机体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖的技术。 动物细胞培养： 思考：“细胞增殖到互相接触的时候，糖蛋白识别了这种信息，就会使细胞停止继续繁殖，出现接触抑制的现象”试结合上述解释，举例说明哪种细胞无接触抑制现象，并阐述原因。 癌细胞。癌细胞的细胞膜上糖蛋白等物质减少。 癌细胞由于无接触抑制而能够继续移动和增殖，导致细胞向三维空间扩展，发生堆积。 是否接触抑制可作为区别正常细胞与癌细胞的标志之一。 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 培养基性质 培养基特有成分 培养结果 培养目的 相同点 获得细胞或细胞产物 常用固体培养基 植物体 葡萄糖、动物血清 常用 ... ...
