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课件网) 第1章 发酵工程 第2节 微生物的培养技术及应用 第2课时 微生物的选择培养和计数 1. 通过实例,理解各类微生物都能适应其生活环境的原理。(生命观念) 2.根据微生物的代谢类型,配制选择培养基,总结分离微生物的过程和测定微生物数量的常用方法。(科学思维) 3.通过对土壤中分解尿素的细菌进行分离和计数,理解并掌握微生物计数的方法。(科学探究) 一、选择培养基 1.概念:在微生物学中,允许特定种类的微生物生长,同时 其他种类微生物 生长的培养基。 2.实验室中微生物的筛选原理:人为提供 (包括营养、温度 和pH等),同时提供抑制或阻止其他微生物生长的条件。 抑制或阻止 二、微生物的选择培养 1.方法:对土样进行充分稀释,然后用涂布器将 均匀地涂布到制备好的 培养基上,这样就可以将聚集在一起的细菌分离开来。 有利于目的菌生长的条件 菌液 选择 2.稀释涂布平板法的操作过程” (1)系列梯度稀释操作: (2)涂布平板操作: ①取菌液:取 菌液,滴加到 。 0.1 mL 培养基表面 ②涂布器灭菌:取出浸在 中的涂布器,放在 上灼烧,待酒精燃尽后, 涂布器。 ③涂布:用涂布器将菌液 地涂布在培养基表面,涂布时可 培养皿, 使涂布 。 火焰 3.培养:待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板 ,放入 中培养1~2 d,观察。 酒精 冷却 均匀 均匀 转动 倒置 恒温培养箱 三、 微生物的数量测定 1.稀释涂布平板法 (1)原理:当样品的 足够高时,培养基表面生长的一个单菌落,来源于样品稀释 液中的一个 。通过统计平板上的 ,就能推测出样品中大约含有多少 活菌。 (2)计数原则:平板上菌落数应为 ,在同一稀释度下,应至少对 个平板进行 重复计数,然后求出 。 (3)不足:当两个或多个细胞连在一起时,平板上观察到的只是 个菌落,所以统计的菌 落数往往比活菌的实际数目 。 稀释度 活菌 菌落数 30~300 3 平均值 一 少 2.显微镜直接计数法 (1)计数工具:显微镜、细菌计数板或血细胞计数板。 (2)不足:由于计数结果是活菌数和死菌数的总和,因此一般计数结果比活菌的实际数目 。 四、 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 1.原理:绝大多数微生物都能利用葡萄糖,但是只有能合成 的微生物才能分解尿素。利用以 作为唯一氮源的选择培养基,可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 多 脲酶 尿素 2.实验设计 (1)土壤取样:从酸碱度接近中性且潮湿的土壤中取样。铲 去表层土,在距地表 cm的土壤层取样。 (2)样品的稀释:测定土壤中细菌的数量,一般选用 倍稀释的稀释液进行平板培养。 (3)微生物的培养与观察:细菌一般在 ℃的温度下培养 d。每隔 h统计一次菌落数目,选取菌落数目 时的记录作为结果。 3~8 1×104、1×105和1×106 1~2 30~37 稳定 24 任务1 对分解尿素的微生物进行分离和计数 活动1 选择培养基 下表是本任务使用的培养基的配方,根据配方配制培养基,分析并回答以下问题: 组分 含量 KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g H2O 定容至1000mL 1.从物理性质上看,此培养基属于哪种类型的培养基 判断依据是什么 2.从功能上看,此培养基属于哪种类型的培养基 此培养基是如何实现其功能的 提示 此培养基从物理性质上看属于固体培养基,因为加入了凝固剂(琼脂)。 提示 此培养基从功能上看属于选择培养基。此培养基的氮源只有尿素,只有能分泌脲酶的微生物才可利用尿素,因此能在此培养基上生长。 3.从表中配方可以看出,配制选择培养基的原则是什么 提示 筛选菌株所用的选择培养基具有能满足所筛选微生物正常生长所需的营养物质或条件,同时不利于非筛选微生物的 ... ...
