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课件网) 第2节 动物细胞工程 动物细胞工程常用的技术： 动物细胞培养 动物细胞融合 动物细胞核移植等 动物细胞工程的基础 皮肤的自体移植 小面积烧伤：植皮(自身)后恢复 1）使用他人皮肤？ 患者自身的不够用，如何解决？ 大面积烧伤？ 2）培养自身细胞？ 从社会中来 1、概念： 从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适当的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。 2、目的： 获得细胞或细胞产物；不能获得完整动物个体。 3、原理： 细胞增殖（有丝分裂） 那么，动物细胞的培养需要哪些条件呢？ 动物细胞培养 动物体 组织 单个细胞 细胞生长和增殖 取出 分散 适宜条件 将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基 含人类未知、细胞生长增殖所必需的物质，满足细胞对未知营养成分的需求。 （1）培养基的构成：合成培养基 + 血清等天然成分 一般使用液体培养基，也称为培养液 动物细胞培养的条件 2.培养条件： （2）培养基的物理性质 糖类、氨基酸、无机盐、维生素 … 无菌、无毒的环境 适宜的温度、pH和渗透压 适宜的气体环境 ①适宜的温度：哺乳动物细胞多以_____为宜； ②适宜的pH：多数动物细胞的适宜pH为_____ ； ③适宜的渗透压：维持细胞正常的形态和功能。 ①培养液、培养用具：灭菌处理； ②无菌操作； 定期更换培养液，以便清除代谢物。 动物细胞培养的条件 36.5±0.5℃ 7.2-7.4 思考？ 如何防止培养过程中的微生物污染？ ③适量添加抗生素 糖类、氨基酸、无机盐、维生素 … 无菌、无毒的环境 适宜的温度、pH和渗透压 适宜的气体环境 01动物细胞培养的条件糖类、氨基酸、无机盐、维生素…无菌、无毒的环境适宜的温度、pH和渗透压适宜的气体环境维持培养液的pH95%空气+5%CO2的CO2培养箱O2：细胞代谢所必需CO2培养箱松盖培养瓶培养皿动物细胞培养的过程 在从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长和增殖。因此，在进行细胞培养时，首先要对新鲜取材的动物组织进行处理，或用机械的方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间，将组织分散成单个细胞。然后，用培养液将细胞制成细胞悬液，再将细胞悬液放入培养皿或培养瓶内，置于适宜环境中培养。 取动物组织 用机械的方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理 单个细胞 加培养液 细胞悬液 体外细胞培养 在培养皿或培养瓶中 细胞分类 悬浮性细胞 贴附性细胞 悬浮在培养液中可生长和增殖（少部分） 贴附于某些基质表面才能生长和增殖 悬浮性细胞的培养过程 取幼龄动物组织 用机械的方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理 单个细胞 加培养液 细胞悬液 原代培养 在培养皿或培养瓶中 ：指动物组织经处理后的初次培养,分瓶前的细胞培养。 细胞密度过大、有害代谢物积累、营养物质缺乏、增殖受阻 分瓶 离心 方法 传代培养 传代培养：分瓶后的细胞培养。 贴附性细胞的培养 取幼龄动物组织 用机械的方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理 单个细胞 加培养液 细胞悬液 原代培养 在培养皿或培养瓶中 接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，通常停止分裂增殖 分瓶 胶原蛋白酶处理、离心法 方法 传代培养 特点：细胞贴壁、接触抑制 癌细胞；癌细胞的细胞膜上糖蛋白等物质减少 取幼龄动物组织用机械的方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理单个细胞加培养液细胞悬液原代培养在培养皿或培养瓶中传代培养分瓶取动物组织（动物胚胎或幼龄动物）用机械的方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶处理单个细胞加培养液细胞悬液原代培养在培养皿或培养瓶中传代培养分瓶1）选幼龄动物（或胚胎）的组织这些个体的细胞分化程度低、增殖能力强，易培养。3）分散细胞时为何不选用胃蛋白酶 ... ...
