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课件网) 第二章 细胞工程 第2节 动物细胞工程 —细胞融合与单克隆抗体 灭活的 仙台病毒诱导 实验：人———鼠细胞荧光标记融合实验 该实验说明： 细胞膜具有流动性 细胞融合 动物细胞融合 概念 原理 诱导方法 使两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的技术。 细胞膜具有一定的流动性 物理法：电融合法 化学法：聚乙二醇（PEG) 生物法：灭活病毒诱导法 与植物原生质体融合的方法相同 动物细胞没有细胞壁，可以直接诱导融合。 灭活病毒诱导细胞融合 的原理是什么呢？ 灭活病毒诱导细胞融合的原理 【拓展】 灭活：是指用物理或化学手段使病毒或细菌失去感染能力，但并不破坏它们的抗原结构。 仙台病毒 紫外线 灭活 丧失感染活性（不感染细胞） 保留融合活性（能诱导细胞融合） 原理：病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞相互凝集， 细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。 灭活病毒诱导细胞融合的原理 【拓展】 动物细胞融合 结果 意义 运用 形成具有原来两个或多个细胞的遗传信息的杂交细胞 突破了有性杂交方法的局限， 使远缘杂交成为可能。 运用 第一 第二 第三 为制造单克隆抗体开辟了新途径。 研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和培育生物新品种等的重要手段。 至今，种间、属间、科间，甚至动物和植物之间的细胞融合都已获得成功。 视频中了解到针对新冠肺炎真正的特效药是什么？ 有没有技术让这两种细胞杂交， 培育出既能产生抗体又能大量增殖的细胞呢？ 血清 （抗体主要分布部位） 向动物体内反复注射某种抗原， 使动物产生抗体， 然后从动物血清中分离所需抗体。 缺陷： 产量低、纯度低，特异性差 血清含量有限 传统抗体制作方法及缺陷： 人们发现，在动物发生免疫反应的过程中，体内的浆细胞可以产生多达百万种以上的特异性抗体， 但是每个浆细胞只分泌一种化学性质单一、特异性强的抗体。 要想获得大量的单一抗体，必须用克隆单个B淋巴细胞形成细胞群。 每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 单一B淋巴细胞 细胞群 选择 克隆 产生 大量纯度高特异性强的抗体 B淋巴细胞不可能无限增殖 要制备单克隆抗体， 就需要找到一种能分泌抗体且增殖能力强的细胞。 一个极富创造力的方案： 动物细胞融合 杂交细胞 动物细胞培养 单克隆抗体 骨髓瘤细胞（癌细胞） 能无限增殖 一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体 1975年，米尔斯坦和柯勒 1984年，诺贝尔生理学或医学奖 既能迅速大量增殖，又能产生专一抗体 从患骨髓瘤的小鼠体内取骨髓瘤细胞的培养 多种已免疫B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 诱导融合 小鼠的脾脏中获取 注射特定的抗原,小鼠脾产生特定抗体的淋巴B细胞 B细胞1 B细胞2 B细胞3 B细胞4 B细胞2 B细胞3 B细胞4 骨髓瘤细胞 B细胞1 杂交1 杂交2 杂交3 杂交4 融合的细胞 B细胞2 B细胞3 B细胞4 骨髓瘤细胞 B细胞1 杂交1 杂交2 杂交3 杂交4 置于选择性培养基上培养 第一次筛选 杂交1 杂交2 杂交3 杂交4 杂交瘤细胞(多种) 第一次筛选： 用特定的选择培养基在该培养基上， 未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡， 只有融合的杂交瘤细胞才能生长 克隆化培养 抗体检测 第二次筛选 (抗原-抗体杂交技术) 能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 杂交瘤细胞(多种) 杂交1 杂交2 杂交3 杂交4 抗体检测呈阳性的杂交瘤细胞 （分泌的抗体能和特定的抗原结合） 体外培养 单克隆抗体 体内或体外培养 能分泌所需抗体的杂交瘤细胞 注射到小鼠腹腔 项目 腹腔培养 体外培养 优点 缺点 易于控制培养条件，操作简单，成本较低 规模小，产量少 可大规模培养，大量生产 需要人为控制培养条件，成本相对较高 单克隆抗体 杂交细胞 杂交瘤细 ... ...
