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课件编号19872385
3.1.1DNA的粗提取与鉴定-(共21张PPT)课件人教版选择性必修三
日期:2024-05-10
科目:生物
类型:高中课件
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来源:二一课件通
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3.1.1DNA
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) 3.1.1 DNA的粗提取与鉴定 授课教师:XXX 选必三 P74 选必三 P74 实践 探究:DNA的粗提取与鉴定 (一)原理 1. 粗提取的原理: (2)DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,它能溶于2 mol/L的NaCl溶液。 (1)DNA不溶于酒精溶液,但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理,可初步分离DNA与蛋白质。 DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异,可以利用这些差异,选用适当的物理或化学方法去除其他成分,对DNA进行提取。 【资料】当氯化钠的物质的量浓度为 2 mol/L时,DNA的溶解度最大 在NaCl溶液浓度低于0.14 mol/L时,DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低;在0.14 mol/L时,DNA溶解度最小;当NaCl溶液浓度继续增加时,DNA的溶解度又逐渐增大。 利用这一特点, 选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解,而使杂质沉淀; 或者让其他成分溶解,DNA析出 补充:(3)DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶—水解蛋白质,对DNA没有影响。 ②高温—大多数 在60~80℃时变性沉淀,而 在 80℃以上才会变性。 ③洗涤剂—溶解细胞膜, 去除 ; 但对DNA没有影响。 蛋白质 DNA 脂质、蛋白质 1. DNA 粗提取的原理: 选必三 P74 实践 探究:DNA的粗提取与鉴定 (一)原理 1. 粗提取的原理: (2)DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同,它能溶于2 mol/L的NaCl溶液。 (1)DNA不溶于酒精溶液,但细胞中某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理,可初步分离DNA与蛋白质。 2. 鉴定的原理: 在沸水浴条件下,DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色,因此用二苯胺试剂鉴定DNA分子。 DNA + 二苯胺 沸水浴 蓝色 选必三 P74 实践 探究:DNA的粗提取与鉴定 (二)材料用具 1. 实验材料的选取: 原则上,凡是含有DNA的生物材料都可以考虑。选用DNA含量相对较高的生物组织,成功的可能性更大。 2. 实验用具: 【思考】可以使用哺乳动物的成熟红细胞作为实验材料吗? × 烧杯、量筒、玻璃棒、 研钵、纱布、漏斗、 试管、试管架、试管夹、 酒精灯、陶土网、三脚架、火柴、 刀片和天平等。 选必三 P74 实践 探究:DNA的粗提取与鉴定 (二)材料用具 3. 试剂: ①研磨液 ②体积分数为95%的酒精 ③2mol/L 的NaCl溶液 ④二苯胺试剂 ⑤蒸馏水 研磨液和二苯胺试剂的配制方法参见本书附录 2(P117) 含有NaCl、EDTA、SDS、Tris和HCl 析出DNA 溶解DNA 鉴定DNA,要现配现用 选必三 P74 实践 探究:DNA的粗提取与鉴定 (三)方法步骤: 取材、研磨 过滤或离心取上清液 预冷酒精析出DNA或离心收集沉淀中的DNA NaCl溶液溶解DNA并鉴定 选必三 P74 实践 探究:DNA的粗提取与鉴定 (三)方法步骤: 1. 取材、研磨: 称取30g洋葱,切碎,然后放入研钵中,倒入10mL 研磨液,充分研磨(可加入少量石英砂)。 研磨的目的: 破碎细胞壁,破坏细胞核,释放出DNA 。 选必三 P74 实践 探究:DNA的粗提取与鉴定 (三)方法步骤: 抑制核酸水解酶的活性,进而抑制DNA降解。 2.过滤或离心取上清液: 在漏斗中垫上纱布,将洋葱研磨液过滤到烧杯中,在4℃冰箱中放置几分钟后,再取上清液。 也可直接将研磨液倒入塑料离心管中,1500r/min的转速下离心5min,再取上清液放入烧杯中。 ①上清液中除DNA之外,可能含有哪些杂质? 可能含有核蛋白、多糖等杂质 ②低温放置几分钟的作用: 纱布允许DNA通过,减少DNA损失。不能用滤纸! 选必三 P74 实践 探究:DNA的粗提取与鉴定 (三)方法步骤: 3. 预冷酒精析出DNA或离心收集沉淀中的DNA 在上清液中加入体积相等的、预冷的酒精溶液(体积分数为95%),静置2-3min,溶液中出现的白色丝状物就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向缓慢搅拌,卷起丝状物,并用滤纸吸去上面的水分; 或将溶液倒入塑料 ... ...
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