(
课件网) 第二节 通过植物体细胞杂交 获得新的植物体 奇思妙想： 地上长番茄， 地下长马铃薯 讨论： 用传统的有性杂交方法能得到这种后代吗？为什么？ 不能；因为两种植物 之间存在着生殖隔离 1978年梅尔彻斯等首次利用 获得了马铃薯和番茄的属间体细胞杂种“马铃薯-番茄”植株。 科研实践： 植物体细胞杂交技术 植物体细胞杂交就是将两个来自不同种植物的体细胞融合成一个杂种细胞， 并把杂种细胞培育成新的植物体的技术。 番茄细胞 马铃薯细胞 ＋ → 杂种细胞 困难： 阻碍着细胞间的融合 细胞壁 思考：如何去掉细胞壁呢？ 酶解法（纤维素酶和果胶酶） 番茄细胞 马铃薯细胞 番茄原生质体 马铃薯原生质体 去除细胞壁 纤维素酶和果胶酶 原生质体定义：利用酶解法去除植物细胞壁后的细胞结构，包括细胞膜、细胞质和细胞核，球形。 注意：与原生质层的区别 显微镜下的球形原生质体 拓展：原生质体与原生质层的区别 指的是脱去细胞壁的细胞。动物细胞也可看做是原生质体。 原生质体 成熟植物细胞的细胞膜、液泡膜和介于这两层膜之间的细胞质。 原生质层 VS 原生质层不包括细胞液和细胞核 原生质体 细胞壁 细胞膜 细胞质 液泡 细胞核 原生质层 细胞壁 细胞膜 细胞质 液泡膜 细胞液 番茄原生质体 马铃薯原生质体 原生质体的优点： ①没有了坚硬致密的细胞壁的阻碍，植物细胞之间的融合得以实现； ②原生质体也更容易被导入外源基因，是植物基因工程的理想受体； ③与完整细胞一样具有全能性，仍可产生细胞壁，经诱导分化成完整植株。 通过植物体细胞杂交获得新的植物体 （原生质体的获取、融合与植物组培） 1 成功培养原生质体是植物体细胞杂交技术的基础 2 由杂种细胞培育出的新植物体可能会具有新的性状 0.5~0.6mol/L的甘露醇 （或一定浓度的蔗糖） (较高渗透压) 纤维素酶、果胶酶 目的使细胞处于微弱的质壁分离状态，这样有利于完整的原生质体的释放，防止原生质体被破坏。 球形的 原生质体 植物 细胞 材料选择：分裂旺盛，再分化能力强的（植物的年龄、生长发育状态等），如根尖、愈伤组织或悬浮培养细胞等。 可用无菌的G6玻璃砂漏斗过滤灭菌。 1.原生质体的获取、培养 1 成功培养原生质体是植物体细胞杂交技术的基础 如何纯化？ 思考：如何纯化原生质体？ 沉降法（低速离心法）：最常用的方法，将过滤和离心相结合，置于离心管离心，原生质体沉于离心管底部，残液碎屑漂浮于上清液；去上清液后，再把沉淀物重新悬浮于清洗培养基中反复3次。 影响原生质体分离的数量和质量的因素：材料的种类和生理状态；酶的种类、酶解时间和温度；酶液的浓度；分离与纯化的方法等。 0.5~0.6mol/L的甘露醇 （或一定浓度的蔗糖） (较高渗透压) 纤维素酶、果胶酶 目的使细胞处于微弱的质壁分离状态，这样有利于完整的原生质体的释放，防止原生质体被破坏。 球形的 原生质体 植物 细胞 材料选择：分裂旺盛，再分化能力强的（植物的年龄、生长发育状态等），如根尖、愈伤组织或悬浮培养细胞等。 可用无菌的G6玻璃砂漏斗过滤灭菌。 1 成功培养原生质体是植物体细胞杂交技术的基础 纯化方法： 沉降法（低速离心法） 需检测原生质体的活力，如何检测？ 1.原生质体的获取、培养 思考：原生质体活力如何检测？ 已学内容 检测方法 观察叶绿体和细胞质流动 胞质环流法 通过模拟实验探究膜的透过性 染色法 氧摄入量评价法 荧光标记法 形态观察法 观察植物细胞的质壁分离及质壁分离复原现象 渗透吸水或失水 举例：荧光标记法(FDA法) FDA本身没有极性，无荧光，可以穿过细胞膜自由出入细胞，在细胞中不能积累。在活细胞中，FDA经酯酶分解为荧光素，后者为具有荧光的极性物质，不能自由出入细胞膜，从 ... ...
