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课件网) 2.2.1 动物细胞培养 2.2 动物细胞工程 1、定义： 从动物体中取出相关组织，将它们分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖。 原理：细胞增殖 一、动物细胞培养 对象：胚胎或幼龄动物细胞 目的：获得细胞或细胞产物 地位：动物细胞工程基础技术 动物细胞培养 （一）动物细胞培养的条件 （三）动物细胞培养的应用 （二）动物细胞培养的过程 （一）动物细胞培养的条件 还记得动物细胞生活的环境吗？ 细胞外液的主要成分呢？ 营养条件 其他条件 动物细胞培养 所需的基本条件 ＜ ＞ 糖类、氨基酸、无机盐、维生素 …… 无菌、无毒的环境 适宜温度、pH、渗透压 适宜的气体环境 （一）动物细胞培养的条件 1、营 养 培养动物细胞一般使用液体培养基，也称为培养液。 ▲培养皿 ▲培养瓶 合成培养基+血清等 合成培养基：葡萄糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素 2、无菌、无毒的环境 培养液定期更换，以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。 对培养液和所有培养用具进行灭菌处理以及在无菌环境下进行操作。 ▲超净工作台 ▲酒精灯火焰附近 加抗生素，更换培养液 1、定期更换培养液的目的是什么？ 2、如何防止培养过程中的微生物污染？ 3、温度、pH和渗透压 温度：36.5±0.5℃ pH：7.2 ~ 7.4 渗透压：等渗 4、气体环境 O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） O2：细胞代谢所必须的 CO2：维持培养液PH CO2培养箱 （二）动物细胞培养的过程 注意关键词: 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 阅读课文44—45页相关内容 动物细胞培养的类型： 第1类：悬浮生长细胞 第2类：贴壁生长细胞 （主流） 接触抑制:当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖。 悬浮培养瓶 细胞贴壁：在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上。 取动物组织 分散成单个细胞（剪碎、胰蛋白酶处理） 制成细胞悬液 原代培养 分散，传代培养 机械法或酶解法：胰蛋白酶或胶原蛋白酶 分解细胞间的蛋白质 1、取动物组织 动物胚胎或幼年动物 增殖能力强，有丝分裂旺盛，取材一般取分化程度低，分裂能力强的 2、分散成单个细胞 为什么？ 机械法或酶解法：胰蛋白酶或胶原蛋白酶 分解细胞间的蛋白质 1、取动物组织 1、有利于细胞营养物质的吸收，代谢废物的排出。 2、成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖 2、分散成单个细胞 （二）动物细胞培养的过程 为什么要分散成单个细胞？ 机械法或酶解法：胰蛋白酶或胶原蛋白酶 分解细胞间的蛋白质 1、取动物组织 2、分散成单个细胞 不能，胃蛋白酶PH为2 ，细胞培养PH7.2-7.4， 要控制时间，否则会消化细胞膜蛋白质，损伤细胞 （二）动物细胞培养的过程 可以用胃蛋白酶吗？处理时间有限制吗？ 1、取动物组织 2、分散成单个细胞 3、制成细胞悬液 4、原代培养 （二）动物细胞培养的过程 细胞悬液放入培养瓶，适宜条件培养。 4、原代培养 初次培养， 特点：细胞贴壁、接触抑制的 （二）动物细胞培养的过程 悬浮生长类：能够悬浮在培养液中生长增殖。 动物细胞生长特点： 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上，称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖 细胞贴壁过程 接触抑制：细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。 接触抑制 动物细胞生长特性 3、过程 4、原代培养 5、传代培养分瓶后的培养 为什么要分瓶培养？怎样处理？ 3、过程 4、原代培养 5、传代培养分瓶后的培养 接触抑制后的贴 ... ...
