(课件网) 普通棉花 转基因抗虫棉 苏云金杆菌 毒蛋白基因 毒蛋白 杀死害虫 第3章 基因工程 ……CTACGATGAATTCC..........GTAGAATTCCCTAA…… ……GATGCTACTTAAGGCAT..........CTTAAGGGATT…… ……CTACGATG ……GATGCTACTTAA AATTCCCTAA…… GGGATT…… AATTCC..........GTAG GGCAT........CTTAA 黏性末端 目的基因 EcoRI剪切目的基因 1.要想获得某个特定性状的目的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 2.如果把两种来源不同的DNA用同种限制酶来切割，会怎样？ 要切2个切口，产生4个黏性(平)末端。 会产生相同的黏性(平)末端 将两个双链DNA片段“连接”起来的酶 G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 1.概念： 2.作用： 3.种类： （1）E.coli DNA连接酶 来源于大肠杆菌，只连接黏性末端 A G T C A T T C G A T A T C G A T C 两DNA片段要具有互补的黏性末端才能拼起来。 将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的 。 磷酸二酯键 E 考里 3.种类： （2）T4 DNA连接酶 来源于T4噬菌体，既能连接黏性末端，又能连接平末端（但连接平末端的效率相对较低）。 *基因工程中通常形成黏性末端 类型 E.coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 来源 功能 只能将具有互补 的DNA片段连接起来 “缝合”两种末端，但连接 的效率相对较低 结果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的 。 大肠杆菌 T4 噬菌体 黏性末端 平末端 磷酸二酯键 注意：DNA连接酶没有识别序列的特异性、只与末端类型有关 3.种类： G A G T A T C DNA 连接酶 DNA 连接酶 A T A G T C C G A A T T DNA连接酶：连接两个DNA片段 C A A T T DNA 聚合酶 DNA聚合酶：以DNA的一条链作为模板，连接游离的脱氧核苷酸，形成磷酸二酯键。 思考：DNA连接酶与DNA聚合酶是一回事吗？为什么？（72页） DNA连接酶 DNA聚合酶 相同点 作用实质 化学本质 不 同 点 模板 作用对象 作用结果 用途 都能催化形成磷酸二酯键 都是蛋白质 不需要 以DNA的一条链为模板 形成完整的重组DNA分子 形成DNA的一条链 基因工程 DNA复制 只能催化两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 DNA连接酶与DNA聚合酶的比较 只能将单个核苷酸连接到已有的DNA片段上，形成磷酸二酯键 与DNA相关的五种酶的比较 名称 作用部位 作用结果 限制酶 磷酸二酯键 将DNA切成两个片段 DNA连接酶 磷酸二酯键 将两个DNA片段连接为一个DNA分子 DNA聚合酶 磷酸二酯键 将单个脱氧核苷酸依次连接到单链末端 DNA(水解)酶 磷酸二酯键 将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸 解旋酶 碱基对之间的氢键 将双链DNA分子局部解旋为单链，形成两条长链 3.根据所学知识，完成以下填空： ①限制酶 ②解旋酶 ③DNA连接酶 ④DNA聚合酶 ⑤RNA聚合酶 b a A.切断a处的酶为_____ B.连接a处的酶为_____ C.切断b处的酶为_____ ① ③④ ② a：磷酸二酯键；b：氢键 4.如图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，图中依次表示限制酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序是( ) A．①②③④ B．①②④③ C．①④②③ D．①④③② C 怎样才能将外源基因送入细胞呢？通常是利用质粒作为载体，将基因送入细胞。 为什么不能直接将外源基因送入细胞呢？ 游离的DNA片段进入受体细胞，一般会直接被分解，就算可以进行转录并翻译成蛋白质、游离的DNA片段也无法随着细胞分裂而进行复制，导致子代细胞中不再含有目的基因。若将目的基因插入载体，由于载体可以在细胞内复制，随着细胞分裂，载体会带着目的基因存在于每个子代细胞中。这样，基因工程才有意义。 什么是质粒？ 1.载体的作用是什么？ 2.有哪些种类？ 3.常用的载体是哪种？其有什么特征？ 4.作为载体应具备什么条 ... ...
