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课件网) 动物细胞工程 动物细胞工程： 重点：动物细胞培养条件、过程；干细胞的类型 动物细胞融合方法，单克隆抗体制备过程、应用 动物体细胞核移植定义、原理、流程 动物细胞培养: 概念,原理,2种酶，2种生长方式（悬浮生长、细胞贴壁）； 接触抑制，原代培养/传代培养；4个培养条件,应用 1.P45为什么选用动物胚胎或幼龄个体的器官或组织做动物细胞培养材料？ 2.细胞培养用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？P44用胃蛋白酶可以吗？ 3.什么是悬浮生长和细胞贴壁？ 4.细胞分裂受阻的原因是什么？解决思路？具体做法 5.什么是原代培养、传代培养？ 6.总结动物细胞培养和植物组织培养的异同。 动物细胞培养P43：从动物体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖。 原理：细胞增殖 2种酶：胰蛋白酶、胶原蛋白酶 幼龄动物的细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛，老龄动物的细胞相反。 分化程度越低的细胞，增殖能力越强，更容易培养。 蛋白质。不行；胃蛋白酶的适宜PH约为2，多数动物细胞培养的适宜PH为7.2-7.4，胃蛋白酶在此环境下失活，所以不行。 悬浮生长（悬浮在培养液中）；细胞贴壁（大多数细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，如贴附于培养瓶的瓶壁上） 4个培养条件：P44①营养：合成培养基，血清（未知成分）,培养液 ②无菌、无毒：灭菌及无菌操作；定期更换培养液，清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害 ③温度、PH、渗透压 ④气体环境：95%空气和5%CO2 CO2作用维持培养液PH 动物细胞培养: 概念,原理,2种酶，2种生长方式（悬浮生长、细胞贴壁）； 接触抑制，原代培养/传代培养；4个培养条件,应用 3.什么是悬浮生长和细胞贴壁？ 4.细胞分裂受阻的原因是什么？解决思路？具体做法 5.什么是原代培养、传代培养？ 6.总结动物细胞培养和植物组织培养的异同。 悬浮生长（悬浮在培养液中）；细胞贴壁（大多数细胞需要贴附于某些基质表面才能生长增殖，如贴附于培养瓶的瓶壁上） 细胞密度过大、有害代谢物积累、营养物质缺乏等 接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。 原代培养：分瓶之前的细胞培养，即动物组织经处理后的初次培养为原代培养。 传代培养：分瓶后的细胞培养为传代培养。 干细胞培养及应用 1.干细胞的分类和分布 2.功能--有自我更新能力和分化潜能 胚胎干细胞的功能？成体干细胞的功能？--P46页 3.应用 ES细胞 诱导多能干细胞：iPS细胞 P46 1.胚胎干细胞的伦理问题、免疫排斥问题 2.诱导方法：导入特定基因、特定蛋白或小分子化学物（P108）等； 成纤维细胞，已分化的T细胞、B细胞等 3.课本P98 T2（4） 概念：使两个或多个细胞结合形成一个细胞 原理：细胞膜流动性 诱导方法：PEG融合法，电融合法，灭活病毒诱导法 意义：突破有性杂交的局限，使远缘杂交成为可能 应用：研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤、培育生物新品种的重要手段，最重要的应用是制造单克隆抗体 一、动物细胞融合P48 :概念、原理、诱导方法、意义、应用 项目 动物细胞融合 植物体细胞杂交 原理 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性和植物细胞的全能性 融合前 用胰蛋白酶等处理分散成单个细胞 纤维素酶、果胶酶去除细胞壁 诱导方法 PEG融合法、电融合法、 灭活病毒诱导法 物理法：电融合法、离心法 化学法：聚乙二醇（PEG）融合法、高Ca2+—高PH融合法 结果 获得杂交细胞或细胞产物 获得杂种植株 用途 制备单克隆抗体（最重要） 培育作物新品种 意义 克服远缘杂交障碍 产量低！纯度低！特异性差！ B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 杂交瘤细胞 米尔斯坦、科勒的设想 诱导动物细胞融合方法：PEG融 ... ...
