3.1.2 DNA的粗提取和鉴定 课件（22张PPT） 2023—2024学年高二下学期生物人教版选择性必修3

(课件网) DNA 的粗提取和鉴定 高中生物选择性必修三 第一节 实验原理 分离 DNA DNA、RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异，可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法对它们进行提取。 DNA 不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。 提取 DNA DNA 在不同浓度的 NaCl 溶液中的溶解度不同，它能溶于 2mol/L 的 NaCI 溶液。 鉴定 DNA 在沸水浴条件下，DNA 遇二苯胺试剂会呈现蓝色。 实验设计 一 实验材料的选取 二 破碎细胞，获取含DNA 的滤液 三 除去滤液中的杂质(纯化) 四 DNA 的析出与鉴定 材料选取 从下列材料中选取 2～3 种： 菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜 鱼卵、猪肝、鸡血、哺乳动物的红细胞 在液体培养基中培养的大肠杆菌 植物材料 动物材料 微生物 材料选取 选用新鲜的鸡血时，注意要加入柠檬酸钠，防止血液凝固。 不能选用牛、羊、猪红细胞血做实验材料。因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核。 遵循原则 注意事项 凡是含有 DNA 的生物材料都可以考虑。 但是，选用 DNA 含量相对较高的组织，成功的可能性更大。 破碎细胞，获取含 DNA 的滤液 动物细胞的破碎较容易。比如在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水 ，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。 动物 细胞 动物细胞和植物细胞的结构不同，所以在破碎细胞的方法上也不同。 水分大量进入血细胞内，使血细胞胀裂，而搅拌加速了鸡血细胞的破裂 (细胞膜和核膜的破裂)，从而释放出 DNA。 破碎细胞，获取含 DNA 的滤液 植物细胞 提取洋葱 DNA 时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。 植物细胞需要先用一定的洗涤剂溶解细胞膜。 加入洗涤剂和食盐的作用分别是什么？ 破碎细胞，获取含 DNA 的滤液 洗涤剂 食盐 洗涤剂是一些离子去污剂，能溶解细胞膜，有利于 DNA 的释放。 食盐的主要成分是 NaCl，有利于 DNA 的溶解。 如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？ 使细胞核内的DNA释放不完全，提取的DNA量变少，影响实验结果，导致看不到丝状沉淀物、用二苯胺鉴定不显示蓝色等。 思考·讨论 这个步骤过滤获得什么？ Q1 Q2 滤液中可能含哪些细胞成分？ 获得含核物质的滤液（获取含DNA 的滤液）。 此时释放出来的大量 DNA 和RNA 往往与蛋白质结合在一起，应用3~4层纱布进行过滤，除去一些颗粒较大的杂质。 注意：应沿一个方向快速搅拌，不能过快过猛，防止打碎 DNA 。 可能含有核蛋白、多糖和 RNA 等杂质。 为了纯化提取的 DNA 需要将滤液作进一步处理。 除去滤液中的杂质 在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为 2mol/L，再过滤。 再用 2mol/L 的 NaCl 溶液 溶解 DNA。 右图所示为 DNA 在 NaCl 溶液中的溶液度的变化曲线。 下面是除去滤液杂质的步骤： 加蒸馏水，调节 NaCl 溶液浓度0.14mol/L 目的： 除去不溶的杂质。 目的： 析出DNA，除去杂质。 目的： 除去滤液中的杂质 为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？ 1. 用 2 mol/L 的NaCl 溶液溶解 DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质； 2. 用 0.14 mol/L 的NaCl 溶液使 DNA 析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。 反复溶解与析出DNA，就能除去与DNA溶解度不同的多种杂质。 除去滤液中的杂质 根据蛋白质的特性（如能被酶分解，高温下变性），还有没有其他除杂质的方法？ 方法二 方法三 直接在滤液中加入嫩肉粉，反应 10~15 min，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。 利用蛋白酶分解杂质蛋白，使提取的DNA与蛋白质分开。 将滤液放在 60~75 ℃ 的恒温水浴箱中保温10~15 min，注意严格控制温度范围。 利用DNA和蛋白质对高温耐受性的不同，使蛋白质变性，与DNA分离。 DNA 的析出 操作 加入与滤液体 ... ...