1.2.2微生物的选择培养与计数学案(含答案）

1.2.2微生物的选择培养与计数学案 【预习新知】 （一）选择培养基 1.自然界中目的菌的筛选：从目的菌株生存的 中找。 (1)实例：聚合酶链式反应(PCR)中用到的耐高温的DNA聚合酶，是从热泉中筛选出来的 中提取出来的。 (2)依据：水生栖热菌能在 ℃的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 2.选择培养基：允许 的微生物生长，同时 其他种类微生物生长的培养基。 3.实验室中目的菌的筛选 (1)原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度和pH等)，同时 其他微生物的生长。 (2)方法：利用 培养基分离。 （二）微生物的选择培养 1g土壤中有多少能分解尿素的细菌 原理：通过对土样进行充分 ，再将 涂布到制备好的培养基上，即可得到能分解尿素的细菌的 。 稀释涂布平板法：是将菌液进行一系列 稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到 的 ，进行培养。 1、稀释涂布平板法的操作过程 ①铲取土样，将样品装入纸袋中。（取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要 ）。 ②将10g土样加入盛有90mL 的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次 稀释。 ③取0.1mL菌液，滴加到 。 ④将 浸在盛有酒精的烧杯中。 ⑤将涂布器放在火焰上 ，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 ⑥用涂布器将 均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 2、菌种培养 待涂布的菌液被培养基吸收后，将 ，放入30～37 ℃的恒温培养箱中培养1～2 d。 3、菌种观察 在涂布有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的 。 （三）微生物的数量测定 1．稀释涂布平板法 (1)原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个_____。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少_____。 (2)计数原则：一般选择菌落数为_____的平板进行计数。样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养。在同一稀释度下，应至少对____个平板进行重复计数，然后求出_____。 (3)注意事项：统计的菌落数往往比活菌的实际数目____，这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是_____菌落。因此，统计结果一般用_____而不是活菌数来表示。 2．显微镜直接计数法 一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。该方法利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量，统计的结果一般是_____的总和。 3．土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 (1)_____取样：从肥沃、湿润的土壤中，用_____铁铲铲去表层土，迅速取土壤并装入_____纸袋密封。 ↓ (2)配制培养基：制备以_____为唯一氮源的选择培养基。 ↓ (3)样品的_____：在火焰旁称取土壤10 g，放入盛有90 mL 无菌水的锥形瓶中，振摇使土样与水充分混合，将菌分散。制成101倍土壤稀释液，从中吸取1 mL 土壤悬液注入盛有9 mL无菌水的试管中，吹吸三次，充分混匀，制成102倍土壤稀释液，以此类推，制成103、____、____、____倍土壤稀释液。 ↓ (4)取样涂布：取9个上述选择培养基分成3组，并做好标记，然后分别从104、105、106倍的三种土壤稀释液中吸取0.1 mL对号放入已做好标记的平板中，用_____在培养基表面轻轻地涂布均匀。 ↓ (5)培养观察：将培养基平板倒置于_____的恒温培养箱中培养1～2 d，每隔24 h统计一次菌落数目，选取菌落数目_____时的记录作为结果。 【巩固训练】 1.下列关于“土壤中分解尿素的细菌的分离与计数”实验的叙述，错误的是( ) A.可以在长期使用尿素肥料的农田土壤中采集土样 B.分离菌种所采用的培养基需添加尿素为唯一氮源 C.利用稀释涂布平板法纯化菌种时常用菌落数作为统计结果 D.实施本实验时所用平 ... ...