倒数第 1 天 基因、蛋白质工程 考点一：科技探索之路 1 ．基因工程是指按照人们的愿望，通过转基因等技术，赋予生物新的遗传特性，创造 出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。从技术操作层面看， 由于基因工程是在 DNA 分子水平上进行设计和施工的，因此又叫作重组 DNA 技术。（P67） 2 ．1944 年，艾弗里等人通过肺炎链球菌的转化实验，不仅证明了遗传物质是 DNA，还 证明了 DNA 可以在同种生物的不同个体之间转移。（P68） 3 ．1958 年，梅塞尔森和斯塔尔用实验证明了 DNA 的半保留复制。随后不久，克里克 提出中心法则。（P68） 4 ．1967 年，科学家发现，在细菌拟核 DNA 之外的质粒有自我复制能力，并可以在细 菌细胞间转移。（P68） 5．1973 年，科学家证明质粒可以作为基因工程的载体，构建重组 DNA，导入受体细胞， 使外源基因在原核细胞中成功表达，并实现物种间的基因交流。至此， 基因工程正式问 世。（P69） 6 ．1983 年，科学家采用农杆菌转化法培育出世界上第一例转基因烟草。此后， 基因工 程进入了迅速发展的阶段。（P69） 7 ．1985 年，穆里斯等人发明PCR，为获取目的基因提供了有效手段。（P69） 考点二：重组 DNA 技术的基本工具 1．切割 DNA 分子的工具是限制性内切核酸酶，简称限制酶，这类酶主要是从原核生物 中分离纯化出来的。它们能够识别双链 DNA 分子的特定核苷酸序列，并且使每一条链 中特定部位的磷酸二酯键断开，产生黏性末端或平末端两种形式的末端。（P71） 2．DNA 连接酶分为两类，一类是 E.coli DNA 连接酶，另一类是 T4DNA 连接酶。后者 既可以“缝合”双链 DNA 片段互补的黏性末端，又可以“缝合”双链 DNA 片段的平末端， 但连接平末端的效率相对较低。（P72） 3 ．质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞拟核 DNA 之外， 并具有自我复制能力的环状双链 DNA 分子。（P72） 4 ．在基因工程操作中，真正被用作载体的质粒，都是在天然质粒的基础上进行过人工 改造的。这些质粒上常有特殊的标记基因，如四环素抗性基因、氨芐青霉素抗性基因等， 便于重组 DNA 分子的筛选。（P72） 5 ．在基因工程中使用的载体除质粒外，还有噬菌体、动植物病毒等。它们的来源不同， 在大小、结构、复制方式以及可以插入外源 DNA 片段的大小上也有很大差别。（P73） 6 ．载体必须具备的条件：①能在受体细胞中保存下来并能自我复制；②具有 1 个或多 个限制酶切割位点，以便与外源基因连接。③具有标记基因。（P72） 7 ．DNA 不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精，利用这一原理，可以初步分离 DNA 与 蛋白质。DNA 在不同浓度的 NaCl 溶液中溶解度不同，它能溶于 2 mol/L 的 NaCl 溶液。 在一定温度下，DNA 遇二苯胺试剂会呈现蓝色，因此二苯胺试剂可以作为鉴定 DNA 的 试剂。（P74“探究·实践”） 考点三：基因工程的基本操作程序 1 ．培育转基因抗虫棉主要需要四个步骤：目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构 建、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定。（P76） 2 ．PCR 是聚合酶链式反应的缩写。它是一项根据 DNA 半保留复制的原理，在体外提 供参与 DNA 复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技 术。（P77） 3 ．PCR 技术可以分为变性、复性和延伸三步。（P78） 4．PCR 反应过程可以在 PCR 扩增仪（PCR 仪）中自动完成，完成以后，常采用琼脂糖 凝胶电泳来鉴定 PCR 的产物。（P79） 5 ．基因表达载体要包括以下四个基本的结构： 目的基因、启动子、终止子、标记基因。 （P80） 6 ．构建基因表达载体的目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且遗传给下一代， 同时，使目的基因能够表达和发挥作用。（P80） 7 ．启动子位于目的基因的上 ... ...
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