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课件网) 第一章发酵工程 第1.2.2节 微生物的选择培养和计数 一、选择培养基 ◆聚合酶链式反应(PCR) 是一种在体外扩增DNA 片 段的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA 聚合酶。 ◆1973年，布鲁克在美国黄石国家公园的一个热泉中 发现了耐热的水生栖热菌，并从这种菌种提取出耐高 温的DNA 聚合酶。 ◆筛选原因：水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生 物在此条件下不能生存。 1.科学实例：寻找耐高温的DNA 聚合酶 一 、选择培养基 美国黄石公园 耐热微生物 耐寒微生物 石油分解菌 根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 一 、选择培养基 2.筛选原则 人为提供有利于目的菌生长的条件(包括营养、温度、pH 等),同时 抑制或阻止其他微生物的生长。 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的 培养基。 3.实验室中微生物筛选的原理 一、选择培养基 4.选择培养基 5.常见的选择培养基 ①加入青霉素的培养基 → 分离酵母菌、霉菌等真菌 ②不加氮源的无氮培养基 →分离固氮菌 ③ 不加含碳有机物的无碳培养基 → 分离自养型微生物 →金黄色葡萄球菌 → 能消除石油污染的微生物 ④ 加高浓度食盐 ⑤加石油 一、选择培养基 尿素[CO(NH ) ] 含氮量高，化学 性质稳定，是现代农业生产中一种重 要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土 壤中的某些细菌分解成NH , 再被转 化为NO -、NH +等被植物吸收。而 这些细菌之所以能分解尿素，是因为 它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解 产生NH ,NH 可以作为细菌生长的 氮源。 思考 ·讨论 选择培养基配方的设计 ———配制以尿素为唯一氮源的培养基， 将尿素分解菌筛选出来 脲酶 CO(NH ) +H O— 尿素的分子模型 分解尿素的细菌 氮源 CO +2NH B.步骤③纯化分解尿素的细菌的原理是将聚集的细菌分散，以获得单菌落 C 步骤③采用稀释涂布平板法接种，并需向牛肉膏蛋白胨培养基中加入 尿素 D.步骤④挑取③中不同种的菌落分别接种，比较不同种细菌分解尿素的 能力 图。下列有关叙述错误的是 A.在配制步骤②③的培养基时，应先 调pH 后湿热灭菌 ①制备红棕②在选择培③筛选、纯④细菌分解尿 壤浸出液 养基中培养化分解尿素素能力的鉴定 的 细 菌 和比较 典例1.如图是研究人员从红棕壤中筛选高效分解尿素的细菌的过程示意 2 mL 1 mL 上清液 如果想知道1g土壤中有多少能分解尿素的细菌，还需对土壤菌液进 行稀释及科学的微生物数量测定方法--稀释涂布平板法。 1、方法 对样品进行充分稀释，然后将菌液涂布到制备好的选择培养基 上。 二、微生物的选择培养 ①铲取图样，将样品装入纸袋中 2、方法步骤 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL 1×102 1×103 1×104 1×105 1×106 1×107 1×10 ②将10g土样加入盛有90mL 无菌水的锥形瓶中，充分摇 匀。取1mL 上清液加入盛有9mL 无菌水的试管中，依次等 比稀释。 二、微生物的选择培养 2、方法步骤 9 mL无菌水 2、方法步骤 ③取0.1mL 菌液滴加到培养基表面。 ④⑤步骤为 涂布器灭菌 1×107 ④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中 ⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精 燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 ④用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培 养皿，使涂布均匀 2、方法步骤 稀释103倍 稀释104倍 空白对照 稀释105倍 恒温培养箱 待涂布的菌液被培养基吸 收后，将平板倒置，放入 30～37℃ 的恒温培养箱中培 养1～2d ,在涂布有合适浓度 菌液的平板上就可以观察到 分离的单菌落( 是 指 由一个 细胞繁殖而来的肉眼可见的 子细胞群体)。 3、培养与观察 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于 样品稀释液中的一个活菌。通过计数平板上的菌 ... ...
