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课件网) 第2节微生物的培养技术及应用 二微生物的选择培养和计数 一、选择培养基 1.概念：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制 或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基 2.原理：人为提供 有利于目的菌生长的条件(包括营 养、 温 度和 pH 等 ) , 同 时抑制或阻止其他微生物的生长 0 3.举例： (1)利用改变培养条件进行选择培养。 70～80℃的高温——— 分离耐高温的水生栖热菌 使用将pH调至酸性的培养基———分离耐酸菌 (2)利用营养条件进行选择培养 不加碳源(含碳有机物)的培养基———分离出自养型微生物 不加氮源的培养基——— 分离出固氮菌 (3)利用添加某种化学物质进行选择培养 加入青霉素——— 分离酵母菌、霉菌等真菌 选择培养基配方的设计 尿素[CO(NH2)2] 含氮量高，化学性质 稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。 尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分 解成NH3, 再被转化为N03-、NH4+等被植物吸 收。而这些细菌之所以能分解尿素，是因为 它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3 ,NH3 可以作为细菌生长的氮源。 讨论：1.如果让你配制一种培养基，将土壤稀释液中能分解尿素 的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计 在选择培养基中，以尿素作为唯一氮源，只有能合成脲酶的细菌才能 生长发育繁殖 2.该培养基与普通培养基有哪些共同点和不同点 除以尿素作为唯一氮源外，该培养基的其他营养成分与普通培养基基本相 同 袋， 1x10 1x10 1x10 1x1041x1051x1061x107 m( )， ②将10g土样加入盛有90mL- 培养基表面。 无菌水的锥形瓶中，充分 摇匀，制成菌液。取1mL上 9mL无菌水 清液加入盛有9mL无菌水的 试 管 中 ，依次等比稀释。 ④将涂布器浸在盛 有酒精的烧杯中。 ⑤将涂布器放在火焰上灼 ⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培 烧，待酒精燃尽、涂布器 养基表面。涂布时可转动培养皿， 冷却后，再进行涂布 使涂布均匀。 选择 L菌液 滴加到 ③取0.1 中 将 纸 样 入 土 装 取 样品 ①铲 二 、微生物的选择培养 1.方法：稀释涂布平板法 2.操作流程 m m m m 90mL无菌水 注意事项： ①10g土样加入盛有90mL无菌水中后，已稀释10倍，在计算 时，不要忽略； ②由于使用的是选择培养基，所以一般情况下，获得的单菌 落即目的菌，但因为有些微生物可以利用目的菌的代谢产物 来生长繁殖，所以还需要进一步验证； ③过程中所有操作都应在酒精灯火焰旁进行； ④将涂布器从酒精中取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽， 然后再放在火焰上灼烧；不要将过热的涂布器放在盛有酒精 的烧杯中，以免引燃酒精。 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板 倒置，放入 恒温培养箱 中培养1-2 d, 在涂布有合适浓度菌液的平板 上就可以观察到分离的 单菌落； 稀释涂布平板法除可以分离微生物外，也常用来统计 样品中活菌的数目； 三 、微生物的数量测定 1.稀释涂布平板法———间接计数法 (1)原理：当样品的稀释度足够高 时，培养基表面生长的一个菌落，来 源于样品稀释液中的一个活菌；通过 计数平板上的菌落数，就能推测出样 品中大约含有多少活菌_; (2)计数原则 ①选择菌落数为_30-300的平板计数 样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目； ②同一稀释度下，应至少对3 个平板进行重复计数，然后求 出平均值； (3)结果分析： ①统计的菌落数往往比活菌的实际数目少 ; 原 因 ：当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的 只是 一 个菌落 ②统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示； (4)计算公式： 每g样品中的菌落数=( C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数 V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL) M代表稀释倍数 2. 显微镜直接计数———直接计 ... ...
