课件26张PPT。专题5 DNA和蛋白质技术 课题1 DNA的粗提取与鉴定1.理解DNA粗提取与鉴定的原理； 2.通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗 提取,了解DNA的物理化学性质； 3.初步掌握DNA的粗提取和鉴定的方法。 以DNA的立体结构为背景，回顾DNA的相关内容，设计问题，导入新课。首先了解实验原理，思考实验内容，学习提取DNA的方法与DNA的鉴定技术，然后以鸡血细胞为例详细地介绍了该实验的方法和步骤。并提醒注意实验的关键性操作及常考知识点，最后通过课堂检测巩固本节课内容。 掌握DNA的粗提取与鉴定的方法是本节课的重点和难点，在教学中先演示实验过程，讲解选用鸡血细胞做材料的原因，两次加蒸馏水的目的是什么，鉴定DNA的方法等。然后结合课本熟悉DNA的粗提取与鉴定，强调实验过程中的重要知识点，这样有助于学生更好的学习DNA的粗提取与鉴定。 ? DNA的立体结构实验原理： 提取原理：DNA主要存在于动植物(鸟类血液的红细胞、新鲜菜花、蒜黄和菠菜等)细胞的细胞核内，且往往与蛋白质结合形成染色质。首先，利用DNA在NaC1溶液中的溶解度具有二重性和蛋白质的盐溶现象，当NaCl的物质的量浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最低,析出DNA，并分离出蛋白质；其次，利用DNA不溶于酒精，但细胞中其他物质(某些盐类、蛋白质、糖类或其他大分子物质)可溶于酒精的特点进一步提取较纯净的DNA；最后，利用DNA遇二苯胺试剂呈蓝色的特异性显色反应鉴定提取DNA。 ???? 鉴定原理：DNA中嘌呤核苷酸上的脱氧核糖遇酸生成戊糖，它再和二苯胺起反应而显现蓝色。1.能否选用牛、羊、马血做实验材料？为什么？2.在第1步中，为什么要用玻璃棒沿一个方向快速搅拌？3.在第1步和第3步中加蒸馏水，的目的有什么不同？4.仔细观察最后提取出的丝状物是什么颜色？一、基础知识1、提取DNA的方法（1）DNA的溶解性 ①DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的盐溶液就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的。②DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质则溶于酒精。利用这一原理，可以将DNA与蛋白质进一步分离。（2）DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ①蛋白酶能水解蛋白质，但是对DNA没有影响。 ②大多数蛋白质不能忍受60~80℃的高温，而DNA在80 ℃以上才会变性。 ③洗涤剂能够瓦解细胞膜， 但对DNA没有影响。2、DNA的鉴定1、材料：鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。（从中选取2～3种实验材料） 2、原则：凡是含有DNA的生物材料都可以考虑，但选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性更大二、实验设计（一）实验材料的选取?（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1、动物细胞的破碎：以鸡血为例，在鸡血细胞液中加入一定量的蒸馏水，同时用玻璃棒搅拌，过滤后收集滤液即可。2、植物细胞的破碎：提取洋葱DNA时，在切碎的洋葱中加入一定的洗涤剂和食盐，进行充分的搅拌和研磨，过滤后收集研磨液。（三）去除滤液中的杂质方案一：在滤液中加入NaCl，使NaCl溶液浓度为2mol/L，过滤除去不溶的杂质，再调节NaCl溶液浓度为0.14mol/L，析出DNA，过滤去除溶液中的杂质，再用2mol/L的NaCl溶解DNA。方案二：直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10~15min，嫩肉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。方案三：将滤液放在60~75℃的恒温水浴中保温10~15℃，注意严格控制温度范围。（四） DNA的析出与鉴定1、DNA的析出： 将处理后的溶液过滤，加入与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液（体积分数为95%），静置2～3min，溶液中会出现白色丝状物，这就是粗提取的DNA。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去上面的水分。2、DNA的鉴定： 取两支20m ... ...
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