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课件网) 第2课时 微生物的选择培养和计数 第1章 发酵工程 <<< 学习目标 1.阐明微生物选择培养的原理。 2.进行土壤中分解尿素的细菌的分离和计数。 内容索引 一、选择培养基、微生物的选择培养和数量测定 二、探究·实践———土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 课时对点练 选择培养基、微生物的选择培养和数量测定 一 1.选择培养基 (1)自然界中目的菌的筛选 ①实例：聚合酶链式反应(PCR)中用到的耐高温的DNA聚合酶，就是从热泉中筛选出的 中提取出来的。 ②依据：水生栖热菌能在 的高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 水生栖热菌 梳理 教材新知 70～80 ℃ (2)实验室中目的菌的筛选 ①原理：人为提供有利于 生长的条件(包括营养、温度和pH等)，同时 其他微生物的生长。 ②方法：利用选择培养基分离。 选择培养基：允许 的微生物生长，同时 其他种类微生物生长的培养基。 目的菌 抑制或阻止 特定种类 抑制或阻止 2.微生物的选择培养 (1)方法：对样品进行充分稀释，然后将 涂布到制备好的 培养基上。 (2)稀释涂布平板法的操作过程 ①系列稀释操作 菌液 选择 a.编号为1×102～1×107试管中分别盛有9 mL 。 b.将 g土样加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀。 c.取1 mL上清液加入盛有9 mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 无菌水 10 ②涂布平板操作 取菌液：取0.1 mL菌液，滴加到 表面 ↓ 涂布器消毒：将涂布器浸在盛有 的烧杯中 ↓ 涂布器灭菌：将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器 后， 再进行涂布 培养基 酒精 冷却 ↓ 涂布平板：用涂布器将 均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培 养皿，使涂布均匀 (3)培养：待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板 ，放入30～37 ℃的 中培养1～2 d。 菌液 倒置 恒温培养箱 3.微生物的数量测定 (1)稀释涂布平板法 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个单菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少 。 ②计数原则：一般选择菌落数为 的平板进行计数。样品的稀释度将直接影响平板上的菌落数目，通常选用一定稀释范围的样品液进行培养。在同一稀释度下，应至少对 个平板进行重复计数，然后求出 。 活菌 活菌 30～300 平均值 3 ③计算公式 (2)显微镜直接计数法 一种常用的、快速直观的测定微生物数量的方法。该方法利用特定的细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下观察、计数，然后再计算一定体积的样品中微生物的数量，统计的结果一般是 的总和。 活菌数和死菌数 特别提醒 显微镜直接计数法本身不能区分细菌的死活，因此一般用来统计总菌数。但是，通过一定的辅助处理，可以实现活菌计数，如在计数前用台盼蓝染液进行染色，可以通过统计无色细胞的个数来对活菌进行计数。 (1)以尿素为唯一氮源的培养基是选择培养基( ) (2)脲酶能催化尿素分解产生N2，N2可作为细菌生长的氮源( ) 提示 分解尿素的细菌合成的脲酶将尿素分解成氨(NH3)，氨可作为细菌生长的氮源。 (3)利用显微镜直接计数法统计的细菌数量就是活菌的数量( ) 提示 利用显微镜直接计数法统计的细菌数量无法区分死菌和活菌。 × × √ 任务一：微生物的选择培养和计数 1.通常1 g土壤中有几亿到几百亿个土壤微生物，其中，细菌的数量最多，能分解尿素的细菌是其中的一部分。设计一种 的选择培养基，可以将分解尿素的细菌分离出来。 探究 核心知识 以尿素作为唯一氮源 2.用平板划线法接种培养结果的图片如图。请结合图片分析，平板划线法能否达到对细菌进行计数的目的？为什么？ 提示 不能；平板划线法最开始的划线很可能菌类会长成一片，导致无法计数，此外灼烧接种环的 ... ...
