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课件网) §2-2 动物细胞工程（1） 细胞工程 从社会中来 治疗大面积烧伤时，通常采用的方法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对这样的病人来说，自体健康皮肤非常有限，使用他人皮肤来源又不足，而且会存在免疫排斥反应。那么，怎样才能获得大量的自体健康皮肤呢？能不能用自体皮肤的单个细胞培养出人的皮肤呢？ 提示：可以从病人身上取少量正常、健康的皮肤在体外进行培养、扩増。目前,科学家还在研究对皮肤干细胞进行培养,以获得适合临床上使用的人造皮肤。 通过细胞培养构建的人造皮肤 动物细胞工程 常用技术 动物细胞培养 动物细胞融合 细胞核 移植等 基础 基础 动物细胞培养是动物细胞工程的基础 一、动物细胞培养 动物细胞培养 人造皮肤 的构建 应用 动物分泌蛋白的规模化生产等 含 义 是指从动物体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖的技术。 思考 Thinking 动物细胞培养需要哪些必要的条件？ 培养的过程又是怎样的呢？ 动物细胞培养的条件 动物体内细胞能够维持正常的生命活动 有些细胞能不断增殖 无菌、无毒的环境 适宜的温度、pH和渗透压 适宜的气体环境 ＜ > 营养 条件 其他 条件 动物细胞 培养所需的基本条件 糖类、氨基酸、无机盐、维生素…… 体外培养动物细胞也需满足类似条件 机体给细胞提供了适宜条件，包括： 充足的营养 稳定的内环境等 原因 体内生活的动物细胞 动物细胞培养的条件 营养条件 作用：提供营养 成分：糖类、氨基酸、无机盐、维生素… 培养基类型： 从化学成分角度分析———合成培养基： 含义：将细胞所需的营养物质按种类和所需量严格配制而成的培养基，称为合成培养基。 说明：由于人们对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚，因此在使用合成培养基时，通常需要加入血清等一些天然成分。 从物理性质角度分析———液体培养基： 培养动物细胞一般使用液体培养基，也称为培养液。 动物细胞培养的条件 其他条件 作用：提供稳定的内环境 条件： 无菌、无毒的环境： 无菌处理： 对培养液和所有培养用具进行灭菌处理； 在无菌环境下进行操作。 无毒处理：定期更换培养液，以便清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害。 温度：哺乳动物细胞培养的温度多以36.5±0.5℃为宜。 pH：多数动物细胞生存的适宜pH为7.2~7.4。 渗透压 动物细胞培养的条件 其他条件 作用：提供稳定的内环境 条件： 适宜的气体环境 气体种类：主要有： O2：是细胞代谢所必需的。 CO2：主要作用是维持培养液的pH。 方法： 通常采用培养皿或松盖培养瓶，并将它们置于含有95%空气和5%CO2的混合气体的CO2培养箱中进行培养。 动物细胞培养的过程 取动物组织块 用机械方法，或用胰蛋白酶、胶原蛋白酶等处理一段时间，将组织分散成单个细胞。 加培养液 制成 细胞悬液 转入培养皿或培养瓶 放入CO2 培养箱中培养 原代培养 原代培养 细胞会因细胞密度过大、有害代谢物积累和培养液中营养物质缺乏等因素而分裂受阻。 含 义 人们通常将分瓶之前的细胞培养，即动物组织经处理后的初次培养称为原代培养。 悬浮在培养液中生长增殖 少数 贴附于某些基质表面生长增殖(细胞贴壁) 体外培养的动物细胞 多数 对细胞 分瓶培养 会发生接触抑制现象(即当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞通常会停止分裂增殖。) 传代培养 动物细胞培养的过程 收集细胞： 离心法收集悬浮培养的细胞； 贴壁细胞用胰蛋白酶等处理，分散成单个细胞，再用离心法收集。 收集的细胞制成细胞悬液，分瓶培养。 传代培养 放入CO2 培养箱中培养 【思考·讨论】有关动物细胞培养的问题 讨论 Discuss 幼龄动物的细胞与老龄动物的细胞比较，分化程 ... ...
