3.2基因工程的基本操作程序（第二课时）课件(共40张PPT) 2024-2025学年人教版（2019）高中生物学选择性必修3

(课件网) 第3章 第2节 人教版 选择性必修3 第二步：基因表达载体的构建 二/ 第一步：目的基因的筛选与获取 一/ 目录 CONTENTS 第三步：将目的基因导入受体细胞 三/ 第四步：目的基因的检测与鉴定 四/ DNA 片段的扩增及电泳鉴定 五/ 02 第二步：基因表达载体的构建 二 第二步：基因表达载体的构建 cDNA文库 5‘ 3‘ 3‘ 5‘ Bt基因 （目的基因） PCR（设计引物加上酶切位点） Bt基因 EcoRⅠ酶切位点 EcoRⅠ酶切位点 二 第二步：基因表达载体的构建 Bt基因！ EcoRⅠ酶切位点 EcoRⅠ酶切位点 （目的基因） Bt基因 二 第二步：基因表达载体的构建 Bt基因 （目的基因） 重组DNA分子 刚才模拟的是什么过程？ 二 第二步：基因表达载体的构建 基因表达载体构建的过程： 质粒 载体 限制酶 目的基因 限制酶切割位点 限制酶切割位点 限制酶 在构建抗虫棉的基因表达载体时，首先会用一定的限制酶切割载体，使它出现一个切口 用同种限制酶或 能产生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段 DNA连接酶 重组 DNA分子 基因表达载体 （核心工作） 二 第二步：基因表达载体的构建 基因表达载体构建的过程： 目的基因 限制酶切割位点 限制酶 用同种限制酶或 能产生相同末端的限制酶切割含有目的基因的DNA片段 DNA连接酶 重组 DNA分子 基因表达载体 目的基因 （核心工作） 为什么要构建基因表达载体？ 使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时使目的基因能够表达和发挥作用。 基因表达载体应该具备什么结构才能到达以上目的？ 二 第二步：基因表达载体的构建 Bt基因 （目的基因） 基因表达载体 如果目的基因需要复制需要什么结构？ 复制原点 如果目的基因需要表达需要什么条件？ 需要启动子和终止子 启动子和终止子应该加在哪？ 启动子 终止子 位于基因首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA。 二 第二步：基因表达载体的构建 启动子类型： 诱导型启动子 组成型启动子 组织特异性启动子 二 第二步：基因表达载体的构建 位于基因首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA。 启动子类型： 诱导型启动子 即在某些特定的物理或化学信号刺激后，基因转录水平在该类启动子的调控下大幅度地提升或降低。 诱导物 作用 诱导型启动子 激活或抑制 目的基因表达 如：光诱导表达基因启动子、热诱导表达基因启动子、创伤诱导表达基因启动子、真菌诱导表达基因启动子和共生细菌诱导表达基因启动子等。 二 第二步：基因表达载体的构建 位于基因首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA。 启动子类型： 组成型启动子 能够调控基因表达，使其基本恒定在一定程度上，从而使基因在不同部位或组织中的表达水平不存在明显差异。这类启动子一般来自于管家基因，可连续不断地启动基因的表达。 如：使Bt基因表达的启动子 可能存在问题： 如外源基因在整株植物中表达，产生大量异源蛋白质或代谢产物在植物体内积累，打破了植物原有的代谢平衡，有些产物对植物并非必需甚至有毒，因而阻碍了植物的正常生长，甚至导致死亡； 二 第二步：基因表达载体的构建 位于基因首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA。 启动子类型： 组织特异性启动子 其调控作用使得基因往往只在某些特定器官或组织中表达，且表现出发育调节的特性。 优点： 启动的外源基因在受体中仅在需要的部位特异表达，克服了组成型启动子启动的外源基因在受体植物中非特异、持续、高效表达所造成的浪费，增加转基因的效果。 P54 P9 ... ...