主干知识排查 一、基因工程的基本工具 1．基因工程又称为_____，指在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，将_____与_____进行组合形成_____，然后导入受体细胞，并使其在受体细胞中表达，产生人类需要的基因产物的技术。 2．限制性内切核酸酶又称限制酶，其_____很强，能识别DNA分子上_____，并使每条链中_____断开。限制酶错位切后形成_____，平切后形成_____。 3．E.coli DNA连接酶，可以用于连接具有_____的DNA分子；T4 DNA连接酶，可以用于连接具有_____的DNA分子。 4．质粒载体应该具有的DNA序列包括：_____；适合的_____，如四环素抗性基因、氨苄青霉素抗性基因，以用于_____；_____，如目的基因(外源基因)插入位点。 二、聚合酶链式反应(PCR)技术 1．PCR扩增DNA片段的过程包括_____等步骤的多次循环。理论上，每经过一个循环，样本中DNA片段的数量增加_____，经过n个循环后，DNA片段数量可扩增至原先的_____倍。 2．PCR反应体系包括：模板DNA、反应缓冲液、dNTP(dATP、dGTP、dCTP、dTTP)、人工合成的DNA引物对、Taq酶、Mg2＋等。 3．可利用_____技术检测PCR扩增产物。 三、基因工程的基本操作程序 1．基因工程的基本操作程序包括目的基因的获取、基因表达载体的构建、将目的基因导入受体细胞，以及_____等步骤。 2．通过_____直接人工合成目的基因，通过筛选基因文库获取目的基因，根据来源可分为_____和_____。 3．基因表达载体除目的基因外，还应该包括_____等。 4．将目的基因导入植物细胞的方法主要是_____，即将目的基因插到农杆菌Ti质粒的_____上，再通过_____将其插入受体细胞_____上，使目的基因得到稳定的遗传和表达。 5．将目的基因导入哺乳动物细胞的方法主要是_____。用一定浓度的_____处理大肠杆菌便能使其成为_____，然后再将其和重组的基因表达载体混合于缓冲液中，在适宜的温度下便可完成转化过程。 6．从DNA方面进行检测，检测方法是_____，其过程需要用到基因探针，即用放射性同位素或荧光标记的已知DNA片段。 7．从RNA方面检测受体细胞，检测目的基因是否能发挥其功能，即是否转录出相应的_____，可以采用分子杂交技术。 8．从蛋白质方面进行检测，一般先从待测转基因生物中提取蛋白质，再用相应的抗体进行_____ _____。 9．为了培育某些特定性状，有时还需要从_____对生物的特定性状进行鉴定。 四、基因工程的应用价值 1．植物基因工程在提高农作物的_____等方面大显身手。动物基因工程的重要价值是_____和_____等。 2．乳腺生物反应器是先将_____与_____等重组起来，转入哺乳动物的受精卵中，再让这些受精卵在母体内生长发育成转基因动物。 3．基因治疗的体内途径是将_____通过载体转入患者体内的某些细胞，_____。体外途径是采用转基因技术将_____导入病毒基因组，再用_____感染受体细胞，治疗基因整合到受体基因组后，受体细胞经体外培养、增殖后导入患者体内。 五、蛋白质工程 1．蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其与_____的关系为基础，对_____进行有目的的设计改造，以改造_____或制造_____。 2．蛋白质工程可以针对相关基因进行改造，即基因的_____，生产出符合人类需求的目标蛋白质。大面积的定向突变一般采用_____的方法，而含有单一或少数几个突变位点的基因定向突变则可采用多种策略。 3．_____是稳定蛋白质分子空间结构最关键的一种共价键，在蛋白质分子中引入_____能显著提高其稳定性。 1．基因工程又称为_____，指_____。 2．限制酶的作用：_____。 3．限制酶不切割细菌本身的DNA分子，可能原因是_____ _____ _____(答出两点)。 4．限制酶XbaⅠ切割产生的DNA片段能与限制酶SpeⅠ切割产生的DNA片段相连接，因为_____；连接完成后，该重组DNA分子的新连接处_____(填“能” ... ...
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