主干知识排查 一、基因工程赋予生物新的遗传特性 1．基因工程的工具有限制性内切核酸酶(简称“限制酶”)、DNA连接酶和载体。基因工程的工具酶有限制性内切核酸酶、DNA连接酶。 2．限制性内切核酸酶(限制酶)的作用：识别_____上特定的核苷酸序列，催化其中特定的两个核苷酸之间的_____水解，使DNA双链在特定的位置断开。断开后的DNA末端分为_____。 3．细菌等微生物细胞内含有的限制酶能破坏_____，“限制”病毒在细菌内寄生等，限制酶的保护作用是细菌等进化出的一种防御机制。 4．DNA连接酶将不同来源的_____通过_____分别连接起来，形成一个稳定的重组DNA分子。 5．E.coli DNA连接酶来自大肠杆菌，仅能连接_____末端；_____来自T4噬菌体，能连接黏性末端和平末端。 6．载体通常是质粒，也可以是_____、_____。质粒是独立于细菌拟核 DNA 之外的较小的_____。 7．DNA的粗提取与鉴定原理 (1)幼嫩的植物材料经过冷冻后再研磨，细胞结构容易被破坏；SDS能使核蛋白_____并与DNA分离；EDTA能_____，防止核DNA被酶解。 (2)DNA在2 mol/L的NaCl溶液中溶解度____；DNA钠盐不溶于酒精而某些蛋白质能溶于酒精，提取液中加入95%的冷酒精，能使DNA钠盐形成絮状沉淀物析出。 (3)DNA鉴定：DNA＋二苯胺蓝色。 8．真核基因的编码序列是_____的(外显子＋内含子)，原核基因的编码序列是_____的。真核细胞中外显子和内含子均会被转录成RNA，再经过RNA加工过程形成可以直接用于翻译的mRNA，_____对应部位会被切除。 9．基因工程的基本操作程序：获取目的基因(_____、借助载体建立_____、PCR技术体外扩增特定的DNA)、_____(基因工程的核心)、将重组DNA分子导入受体细胞、检测目的基因及其表达产物。 10．化学合成法需要已知目的基因全部序列，且成本较高，适于合成序列较短的基因。不同组织细胞的cDNA文库是_____的；同一组织细胞在不同的发育阶段，cDNA文库也会有_____。 11．PCR技术需要的基本条件：模板、原料(dNTP)、_____酶和_____，包括_____(90～95 ℃)、_____(50～60 ℃)、_____(约72 ℃)3个步骤。 12．PCR扩增中，DNA 呈_____形式扩增；扩增 DNA 片段的起点和终点由_____决定。 13．利用PCR扩增1个DNA片段，经过n次循环后，反应体系中共有_____个DNA片段，其中目标DNA片段(两条核苷酸链等长的DNA分子)有_____个，共消耗引物_____个。 14．PCR的产物可利用_____来鉴定。在凝胶中，DNA的迁移速率主要受DNA片段_____的影响。DNA分子越大，向正极迁移速率越____。 15．如果扩增条带不止一条，可能的原因有_____ _____等。 16．表达载体：使目的基因既能_____又能_____的载体。表达载体包含适当的转录和翻译信号。 17．构建重组DNA分子过程：用_____或能产生_____的限制酶剪切含有目的基因的DNA片段以及表达载体→利用_____将目的基因与表达载体连接起来。 18．目的基因导入原核细胞时用_____溶液处理，制备_____细胞。将目的基因导入动物细胞时，常使用_____法。将目的基因导入植物细胞时，常使用_____法。 19．将目的基因插入质粒的_____ 中，用重组 Ti 质粒_____农杆菌，再让农杆菌感染植物细胞，目的基因就会随 T－DNA 整合到植物_____中，最后通过_____可培育出完整的转基因植株。 20．检测目的基因及其表达产物 (1)检测DNA———确定目的基因在受体细胞中是否稳定存在：借助载体上的_____检测、_____检测、核酸分子杂交。 (2)RNA、蛋白质及个体水平上的检测———确定目的基因是否正确表达： ①mRNA：_____技术，判断目的基因在受体细胞内是否成功转录出mRNA； ②蛋白质：_____技术，判断目的基因在受体细胞内是否成功表达出相应蛋白质； ③个体：观察测定个体是否表现出目的基因控制的_____并稳定遗传，是判断转基因成功的直接证据。 二、 ... ...
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