课件25张PPT。实验2 分离以尿素为氮 源的微生物任务1：怎么从土壤中分离出能分解尿素并将其作为氮源的微生物呢？利用以尿素为唯一氮源 的培养基进行筛选。（1）将土壤中的固氮菌分离出来（2）将土壤中自养微生物分离出来举一反三（3）筛选出抗青霉素的微生物（4）筛选出耐高浓度食盐的微生物……配制培养基尿素培养基25ml 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 水 15ml 尿素 10ml 功能上是选择培养基琼脂是未被纯化的混合物,内含一定量的含氮化合物琼脂糖不含氮元素，但有固化作用。物理性质（形态）上是固体培养基选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制和阻止其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。 配制培养基尿素培养基25ml 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 水 15ml 尿素 10ml 琼脂糖 0.5g 琼脂是未被纯化的混合物,内含一定量的含氮化合物琼脂糖不含氮元素，但有固化作用。1、通过什么方法可以判断细菌确实能将尿素分解成氨。思考： 方法：在以尿素作为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂,接种培养该细菌，若指示剂变红，说明该种菌能将尿素分解成氨。尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 10ml 水 15ml 细菌 尿素 NH3 中性 碱性 酚红颜色： 黄色 红色(变色范围 pH6.4-8.2)任务1：怎么从土壤中分离出它们呢？利用以尿素为唯一氮源 的培养基进行筛选。2、要验证以尿素为唯一氮源的培养基 对土壤中的细菌确实具有选择作用，你 该如何设计实验。思考： 配制培养基尿素培养基 葡萄糖 0.025g NaCl 0.12g K2HPO4 0.12g 琼脂糖 0.5g 酚红 0.25g 尿素 10ml 选择培养基实验组二、实验目的: 使用以尿素为唯一氮源的培养基分离细菌(有脲酶) 通过指示剂（酚红）颜色的变化检知培养基pH的变化(脲酶催化的化学反应) 统计被检测的土壤中含有的以尿素为氮源的微生物的数量三、实验中涉及到的一些问题：（一）哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多？（选材的问题）（二）此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质？（三）可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物对尿素分解能力的高低？（四）统计微生物的数量可用哪些方法？没硬化，腐殖质丰富的土壤碳源、尿素、无机盐、水、酚红培养基红色的深浅和区域的大小稀释涂布平板法，显微镜直接计数法三、实验中涉及到的一些问题：（五）用稀释涂布平板法计数时，菌落数在30-300计数。重复性原则对照原则（排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验的可信度）做一系列浓度梯度实验，探究合适的稀释度（六）实验设计要遵循的原则： 过滤灭菌后的尿素（二）制备细菌悬液 制备成10-2、10-3、10-4、10-5 土壤稀释液配制菌悬液1个99ml无菌水 2个4.5ml无菌水得10-2, 10-3, 10-4的菌悬液1g土壤倒平板需要倒3个LB平板，9个尿素平板每个稀释度 1个LB对照平板 3个尿素平板(平行重复组)接种取0.1ml菌悬液涂布分离涂布分离37℃倒置培养按浓度捆成一摞恒温37℃培养10-4 、 10-3,、 10-2利用血球计数板的缺点:不能区分死菌与活菌不适于对运动的细菌计数需要相对高的细菌浓度个体小的细菌在显微镜底下难以观察练习题1、选择培养基：在微生物学中，将允许 种类的微生物生长，同时 和 其他种类微生物生长的培养基，称作选择培养基。 阻止 特定抑制2、常用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。当样品的 足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个 。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在 的平板进行计数。此外，测定微生物数量的常用方法还有 直接计数。 显微镜 稀释度细菌30-3003、在同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数 ... ...
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