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课件网) 如何将DNA提取出来，并进行鉴定呢 AJI DNA DNA 1.掌握DNA粗提取与鉴定的实验原理 2.理解并掌握DNA粗提取的过程与鉴定的方法 学习目标 自学指导：阅读课本P74-75内容，回答下列问题(4min ) 1.该实验的实验目的、实验原理、实验材料、试剂及其作用分别是 2.该实验的方法步骤可以简单的归纳为哪四步 3.研磨的目的是 4.如何取上清液(两种方法) 5.上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质 低温放置几分钟的作用是 6.搅拌时应轻缓、并沿一个方向的目的是 与蛋白质。 最低。利用这一原理，可以使 (2)DNA 在不同浓度的NaCl 溶液中的溶解度不同， DNA 在盐溶液中溶解或析出。 溶解度 2.鉴定DNA 的原理 在一定温度下( 沸 水 浴 ) , DNA 遇_二苯胺试剂会呈现蓝 色 0.14mol/L 2mol/L NaCl浓 度 1.提取DNA 的原理 利用DNA、RNA、 蛋白质和脂质等在物理和化学性 当NaCl 浓度为 2 mol/L 时， DNA 的溶解度最大，浓度为 0.14 mol/L时 ，DNA的溶解度 探究和实践 一、实验原理 (1)DNA 不溶于_酒精，某些蛋白质_溶于酒精，利 DNA 的粗提取与鉴定 探究和实践 DNA 的粗提取与鉴定 二 、目的要求： 1.了解DNA的物理化学性质，理解DNA 粗提取和鉴定的原理。 2.学会DNA粗提取的方法以及利用二苯胺试剂对DNA 进行鉴定。 三 、材料用具 ： 1.材料：DNA 含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。 (注意：不能选择哺乳动物成熟的红细胞，因为哺乳动物成熟的红细胞中没有细胞核 和线粒体，几乎不含DNA。) 猪肝 洋葱 菠菜 花菜 香蕉 探究和实践 的粗提取与鉴定 2.试剂及作用 (1)研磨液 ———溶解并提取DNA (2)体积分数为95%的酒精 — 析 出DNA (3)2mol/L的NaCl溶液 — 溶 解DNA (4)二苯胺试剂 — 鉴定DNA, 要现配现用 (5)蒸馏水 滴入NaCl溶液中，使其浓度逐渐下降至0.14mol/L, 从而 研磨液成分 作用 SDS 使蛋白质变性 EDTA 抑制DNA酶 Tris-HCl缓冲液 稳定DNA 研磨液、二苯胺的配制方法在课本P117 析出DNA DNA 通 " 烧杯、量筒、玻璃棒、研钵、纱布、漏斗、 离心机 电子天平 试管、试管架、剪刀 探究和实践 DNA 的粗提取与鉴定 探究和实践 DNA 的粗提取与鉴定 四 、方 法 步 骤 ( 四 目的：破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中 1.研磨洋葱： 称 取 约 3 0 总，切碎，然后放入研钵中，倒入 10mL_ 研磨液 ，充分研磨。 2.去除杂质，取上清液： 上清液中除DNA之外，可能含有核蛋白、多糖等杂质 方案一：在漏斗中垫上纱布，将洋 仅过滤到烧杯中，在4℃ 冰箱中放置几分钟后，再取 上清液 。 方案二：也 直接将研磨液倒入塑料离心管中，在1500r/min 的 转速下离心 上清液放入烧杯中。 抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解；抑制 DNA 分子运动，使DNA 易形成沉淀析出； 过滤取上清液 方案一： 在上清液中加入体积相等的、 预冷的酒精 溶液(体积分 数为95%),静置2～3min, 溶液中出现的白色丝状物 就是粗提取 的DNA 。用玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物，并用滤纸吸去 上面的水分； 减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子 方案二：将溶液倒入塑料离心管中，在10000r/min的转速下离心 5min, 弃上清液，将管底的沉 淀 物 ( 粗 提 取 的DNA) 晾 干。 DNA 的粗提取与鉴定 低温可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解； 低温抑制DNA分子运动，使DNA易形成沉淀析出； 低温有利于增加DNA的柔韧性，减少断裂。 探究和实践 四 、方 法 步 骤 ： 3.析出DNA: 用冷却的酒精析出DNA 取两支20mL 的试管，各加入2 mol/L的NaCl 溶液5mL。 将丝状物 或沉淀物溶于其中一支试管的NaCl溶液中。然后，向两支试管中 各加入4mL 的_二苯胺试剂 。混合均匀后，将试管置于沸 水 中 加热5min。待 ... ...
