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课件网) 高中生物选择性必修3 生物技术与工程 第3章基因工程 第1节重组DNA 技术的基本工具 第2课时探究 · 实践 DNA 的粗提取与鉴定 厂 探究 ·实践 DNA的粗提取与鉴定 一、基本思路 选用一定的物理或化学方法，分离具有不同物理或化学性质的生物大分子。 实验设计思路： DNA、RNA、 蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面存在差异， 可以利用这些差异，选用适当的物理或化学方法去除其他成分，对DNA进行提取。 口 二、原理 1.提取原理 (1) DNA不溶于酒精，但某些蛋白质溶于酒精。 (2) DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同， 能溶于2mol/L NaCl溶液。 2.鉴定原理 在一定温度下(沸水浴) , DNA遇二苯胺试剂会呈现蓝色， 因此二苯胺试剂可以作为鉴定DNA的试剂。 NaCl浓 度 (mol/L) a N A 溶 解 度 DNA含量相对较高的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等。 用洋葱做材料，为什么要充分研磨 充分研磨，可以破坏细胞壁，裂解细胞，释放DNA。 猪血和鸡血，哪个适合用作提取DNA的材料 操作时如何防止血液凝固 猪血(哺乳动物的成熟红细胞)无细胞核，不适合； 鸡血中红细胞有核DNA, 且核DNA的量较多，适合。 鸡血中加入柠檬酸钠，可防止血液凝固。 : 如果用鸡血动物细胞做材料，也需要研磨裂解释放细胞中的DNA 吗 加入清水，让细胞吸水胀破，释放DNA。 F 探究 · 实践 DNA的粗提取与鉴定 三、材料用具 1. 选 材 ： 体积分数为95%的酒精 析 出DNA 2mol/L 的 NaCl溶 液 溶 解DNA 二苯胺 鉴定DNA, 要现配现用 广 探究 ·实践 DNA的粗提取与鉴定 研磨液成分 SDS EDTA Tris-HCI缓冲液 作用 使蛋白质变性 抑 制DNA酶 稳 定DNA 2.试 剂 ： 研磨液 北京 茅德科技有限公=5ize:0 二苯胺试剂(1.5% 溶解并提取DNA s 蒸馏水 试 剂 — 起 来 做 高中生物学实验 探究 · 实践 DNA的粗提取与鉴定 口 取材研磨 四 、实验步骤 DNA鉴 定 过 滤 DNA 析 出 F 探究 ·实践 DNA的粗提取与鉴定 四、方法步骤 取材研磨 称取洋葱 ，切碎，放入研钵，倒入 研磨液， 充分研磨。 问题：如果研磨不充分会对实验结果产生怎样的影响 研磨不充分，会使DNA分子不能从细胞核中释放出来， 从而使研磨液中的DNA含量较低，影响最终提取的DNA量。 研磨液成分 作用 SDS 使蛋白质变性 EDTA 抑制DNA酶 Tris-HCI缓冲液 稳定DNA 析 出 鉴 定 DNA DNA 过 滤 称取 洋葱 ，切碎，放入研钵，倒入 研磨液， 充分研磨。 (1)研磨的目的： 破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中 (2)研磨时间不宜太长： 防止研磨时产生的热量影响DNA的提取量 (3)有条件的可以在材料处理的过程中加入纤维素酶、果胶酶 研磨效果好(有利于充分研磨) (4)研磨不宜太用力 F 探究 ·实践 DNA的粗提取与鉴定 四、方法步骤 取材研磨 过 滤 DNA 析 出 DNA鉴 定 在漏斗中垫上纱布过滤研磨液，4℃冰箱中静置后取上清液； 或将研磨液倒入塑料离心管中离心，取_上清液 。 问题1: 过滤能用滤纸代替吗 不可以，因为DNA会被吸附到滤纸上而大量损失。 问题2: 上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质 可能含有核蛋白、多糖等杂质 F 探究 · 实践 DNA的粗提取与鉴定 过 滤 DNA 析 出 DNA鉴 定 四、方法步骤 取材研磨 使蛋白质等溶解在酒精中， DNA不溶于酒精而析出。 问题2: 酒精预冷的作用 ①可抑制核酸水解酶的活性，进而抑制DNA降解； ②抑制分子运动，使DNA易形成沉淀析出； ③低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂。 在上清液中加入体积相等的 预冷的酒精_溶液，静置 2~3min, 溶液中出现的_白色丝状物_就是粗提取的DNA。 问题3: 搅拌时应轻缓、并沿一个方向目的 减少DNA断裂，以便获得较完整的DNA分子 F 探究 ·实践 DNA的粗提取与鉴定 四 、方 法 ... ...
