3.2 基因工程的基本操作程序（第2课时） 课件（共32张PPT）2024-2025学年人教版（2019）高中生物学选择性必修3

(课件网) 3.2基因工程的基本操作程序 第2课时 将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测与鉴定 基因工程的基本操作程序（4个步骤） 目的基因的筛选与获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定 旧知回顾 目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程，称为转化。 实质：将目的基因整合到受体细胞基因组中。 将目的基因导入受体细胞的方法： 导入植物细胞 导入动物细胞 导入微生物细胞 农杆菌转化法 花粉管通道法 显微注射法 Ca2+转化法 （我国科学家独创） （常用） 转化的概念： 将目的基因导入受体细胞 方法一：用微量注射器将含目的基因的DNA 溶液直接注入子房中 含目的基因的DNA 溶液 花粉管通道法（我国科学家独创） 将目的基因导入受体细胞—植物细胞 方法二：在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊。 花粉管通道法 将目的基因导入受体细胞—植物细胞 农杆菌是一种在土壤中生活的微生物，能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。 农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞时，Ti质粒的 T-DNA可转移至被侵染的细胞，并整合到该细胞的染色体DNA上。 （可转移的DNA） 1.农杆菌的特点： 农杆菌转化法 任务：分析将目的基因导入受体细胞和目的基因的检测与鉴定 1.在用农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞的过程中，一定要将目的基因插入到Ti质粒的T－DNA(可转移的DNA)上，原因是农杆菌中的Ti质粒上的T－DNA_____ _____。 可转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上 [思考]构建基因表达载体时，目的基因该插到Ti质粒哪里？ 探究—学习笔记P64 将新鲜的从叶片上取下的圆形小片与农杆菌共培养，然后筛选转化细胞，并再生成植株 将花序直接浸没在含有农杆菌的溶液中一段时间，然后培养植株并获得种子，再进行筛选、鉴定等 导入体细胞 导入受精卵 2.操作方法： 农杆菌转化法 随着转化方法的突破，用农杆菌侵染水稻、玉米等多种单子叶植物也取得了成功。 第一次拼接 第二次拼接 第一次导入 第二次导入 (2)两次导入： 1.农杆菌转化法中两次拼接、两次导入的辨析 (1)两次拼接： 第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的T－DNA上；第二次拼接(非人工操作)指被插入目的基因的T－DNA拼接到受体细胞染色体的DNA上。 第一次导入是将含目的基因的重组Ti质粒导入农杆菌；第二次导入(非人工操作)是将含目的基因的T－DNA导入受体细胞。 核心归纳—学习笔记P65 目的基因的表达载体提纯 取卵 （受精卵） 显微注射 早期胚胎培养 获得具有新性状的动物 ①个体大，易操作。 ②受精卵全能性高，易培养成完整个体。 显微注射法 1.操作方法： 2.过程： 将目的基因导入受体细胞—动物细胞 胚胎移植 注射器 固定吸管 【补充】病毒侵染法 科学家用病毒DNA与目的基因一起构建的载体，去感染受体动物细胞，也能使目的基因导入动物细胞内，如腺病毒载体等。 感受态细胞 Ca2+处理细胞 重组基因表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收重组DNA分子 42℃,1min 冰上3min Ca2＋处理 1.操作方法： 2.过程： 将目的基因导入受体细胞—微生物细胞 常用原核生物作为受体细胞，其中以大肠杆菌应用最为广泛，一般先用Ca2＋处理大肠杆菌细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后再将重组的基因表达载体导入其中。 【注意】原核生物作为受体细胞产生的真核生物的蛋白质通常没有生物活性，需要在体外进行再加工。 （因为没有内质网、高尔基体对蛋白质进一步加工。） 2.受体细胞的选择 (1)对于植物来说，受体细胞可以是受精卵或 ... ...