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课件网) 第2节 微生物的培养技术及应用 二 微生物的选择培养和计数 1.科学实例：寻找耐高温的DNA聚合酶 聚合酶链式反应（PCR）是一种在体外扩增DNA片段的技术，此项技术要求使用耐高温的DNA聚合酶。 1973年，布鲁克在美国黄石国家公园的一个热泉中发现了耐热的水生栖热菌，并从这种菌种提取出耐高温的DNA聚合酶。 一、选择培养基 美国黄石公园的热泉 美国黄石公园的热泉 美国黄石公园的热泉 美国黄石公园的热泉 美国黄石公园 根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找 筛选原因：水生栖热菌能在70-80℃高温条件下生存，而绝大多数微生物在此条件下不能生存。 从生物与环境的关系上分析，为什么科学家会想到去热泉中寻找栖热菌？ 根据微生物对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 2.筛选原则 耐寒微生物 耐热微生物 石油分解菌 一、选择培养基 实验室筛选微生物的原理 人为提供有利于目的菌株生长的条件（包括营养、温度和PH值等），同时抑制或阻止其它微生物的生长 筛选方法： 用选择培养基筛选 分离酵母菌、霉菌等真菌 分离固氮菌 分离自养型微生物 3.选择培养基：允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基，叫做选择培养基。 ④加高浓度食盐 金黄色葡萄球菌 ⑤加多环芳烃（石油主要成分）为唯一碳源 能消除石油污染的微生物 一、选择培养基 ③不加含碳有机物的无碳培养基 ②不加氮源的无氮培养基 ①加入青霉素的培养基 二、微生物的选择培养 稀释涂布平板法：必须要对土样充分稀释后，然后将菌液涂布到制备好的选择培养基上。 1.微生物选择培养获取纯培养物的方法 优点：分离并计数某种微生物的数量（例如，能分解尿素的细菌）。 缺点：操作步骤繁琐，容易被杂菌污染 ①铲取土样，将样品装入纸袋中 ②将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中，充分摇匀，制成菌液。 稀释涂布平板法的操作过程 1mL 1ⅹ10 90mL无菌水 1ⅹ107 1ⅹ105 1ⅹ106 1ⅹ103 1ⅹ102 1ⅹ104 1mL 1mL 1mL 1mL 9mL无菌水 1mL ②取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 2.稀释涂布平板法的操作过程 ③取0.1mL菌液，滴加到培养基表面。 ④将涂布器浸在盛有酒精的烧杯中。 ⑤将涂布器放在火焰上灼烧，待酒精燃尽、涂布器冷却后，再进行涂布。 ⑥用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。涂布时可转动培养皿，使涂布均匀。 待涂布的菌液被培养基吸收后，将平板倒置，培养 稀释涂布平板法的操作过程 ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过计数平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 缺点：统计的菌落往往比活菌的实际数目低； ②计数原则 因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 1.间接计数法 — 稀释涂布平板法 三、微生物的数量测定 选择30-300个菌落的平板进行计数； 每个稀释度至少取3个平板取其平均值； 恰当的稀释度、涂布是否均匀是成功统计菌落数目的关键 M代表稀释倍数； C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数； V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL) ③计算公式：每g样品中的菌落数＝(C÷V)×M 例题1：某同学在稀释倍数为106 的培养基中测得平板上菌落数的平均数为234，那么每g样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.1mL) ( ) A. 2.34×108 B. 2.34×109 C. 234 D. 23.4 B 某同学在对土壤中高效降解化合物A的细菌进行分离计数时，在3个平板培养基上分别接种稀释倍数为10６的菌液分别为155,160,177个，则每毫升原菌液中上述分解化合物Ａ的细菌的数量约为 。 1.64X109 不能区分死菌与活菌； 个体小的细菌在显微镜下难以 ... ...
