3.1.2 DNA的粗提取与鉴定 高中生物人教版（2019）选择性必修3课件(共24张PPT)

(课件网) 第三章 基因工程 第1节 重组DNA技术的基本工具 （第二课时） 学习目标： 1.简述重组DNA技术所需的三种基本工具及其作用。 2.认同基因工程的诞生和发展离不开理论研究和技术创新。 3.进行DNA的粗提取与鉴定。 DNA、RNA、蛋白质和脂质等在 方面存在差异， 可以利用这些差异，选用适当的 对它们进行提取。 物理和化学性质 物理和化学方法 1.提取DNA的原理： ① 不溶于酒精，但 溶于酒精。 ②DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同，能溶于 mol/L NaCl溶液。 2.鉴定DNA的原理： 在一定温度下，DNA遇 试剂会呈现 。 →可初步分离DNA和蛋白质 DNA 某些蛋白质 2 二苯胺 蓝色 注：二苯胺有毒，需现配现用并用棕色瓶存放。 1.实验思路： 2.实验原理： P74探究·实践 DNA的粗提取与鉴定 扩展 DNA在NaCl溶液中的溶解度具有显著的浓度依赖性。 ①DNA在 mol/L的NaCl溶液中溶解度最小， 此时DNA （填“溶解”或“析出”） ②DNA在 mol/L的NaCl溶液中溶解度最大， 此时DNA （填“溶解”或“析出”） 0.14 溶解 析出 2 P74探究·实践 DNA的粗提取与鉴定 的生物组织，如新鲜洋葱、香蕉、菠菜、菜花和猪肝等； DNA含量相对较高 注意： ①不能用哺乳动物的血液作为材料，原因: 。 ②以血液为实验材料时，每100mL血液中需要加入3g (抗凝剂)，原因: 。 ③利用动物细胞提取DNA破碎细胞的方法: 。 成熟的红细胞中无细胞核和线粒体，几乎不含DNA 柠檬酸钠 防止血液凝固 直接吸水涨破(原因：动物细胞无细胞壁) 3.材料用具（材料）： P74探究·实践 DNA的粗提取与鉴定 ①研磨液 ②体积分数为95%的酒精 ③2mol/L的NaCl溶液 ④二苯胺试剂 ⑤蒸馏水 →保护DNA，破坏膜结构； →析出DNA； →溶解DNA； →鉴定DNA； 烧杯、量筒、玻璃棒、研钵、纱布、漏斗、试管、试管架、试管夹、酒精灯、陶土网、三脚架、火柴、刀片和天平等 3.材料用具（试剂）： 3.材料用具（用具）： P74探究·实践 DNA的粗提取与鉴定 P74探究·实践 DNA的粗提取与鉴定 取材研磨 DNA析出 DNA鉴定 称取 ，切碎，放入研钵，倒入 ， 研磨。 洋葱 研磨液 充分 破碎细胞，使核物质容易溶解在研磨液中 防止研磨时产生的热量影响DNA的提取量 研磨效果好（有利于充分研磨） (4)研磨不宜太用力 (1)研磨的目的： (2)研磨时间不宜太长： (3)有条件的可以在材料处理的过程中加入纤维素酶、果胶酶 过 滤 4.方法步骤： P74探究·实践 DNA的粗提取与鉴定 取材研磨 过 滤 DNA析出 DNA鉴定 称取 ，切碎，放入研钵，倒入 ， 研磨。 洋葱 研磨液 充分 问题：如果研磨不充分会对实验结果产生怎样的影响？ 研磨不充分，会使DNA分子不能从细胞核中释放出来，从而使研磨液中的DNA含量较低，影响最终提取的DNA量。 研磨液成分 作用 SDS 使蛋白质变性 EDTA 抑制DNA酶 Tris-HCl缓冲液 稳定DNA 4.方法步骤： P74探究·实践 DNA的粗提取与鉴定 取材研磨 过 滤 DNA析出 DNA鉴定 在漏斗中垫上 过滤研磨液，4℃冰箱中静置后取 ；或将研磨液倒入塑料离心管中离心，取 。 纱布 上清液 上清液 问题1：过滤能用滤纸代替吗？ 不可以，因为DNA会被吸附到滤纸上而大量损失。 问题2：上清液中除DNA之外，可能含有哪些杂质？ 可能含有核蛋白、多糖等杂质 4.方法步骤： P74探究·实践 DNA的粗提取与鉴定 在1500 r/min的转速下离心5 min 取材研磨 过 滤 DNA析出 DNA鉴定 在漏斗中垫上 过滤研磨液，4℃冰箱中静置后取 ；或将研磨液倒入塑料离心管中离心，取 。 纱布 上清液 上清液 问题3：低温放置几分钟的作用？ ①抑制DNA水解酶的活性，进而抑制DNA降解； ②低温有利于增加DNA分子的柔韧性，减少其断裂； 4.方法步骤： P74探究·实践 DNA的粗提取与鉴定 在1500 r/m ... ...