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课件网) 动物细胞工程（一） ———动物细胞培养 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体技术 核移植 动物细胞工程常用技术 一、动物细胞培养的概念 二、动物细胞培养的过程 三、干细胞 动物细胞培养 治疗大面积烧伤时，通常采用的方法是取烧伤病人的健康皮肤进行自体移植。但对这样的病人来说，自体健康皮肤非常有限，使用他人皮肤来源又不足，而且会存在免疫排斥反应。那么，怎样才能获得大量的自体健康皮肤呢？能不能用自体皮肤的单个细胞培养出人的皮肤呢？ 动物细胞培养 动物细胞培养是指从动物体中取出相关组织，将它分散成单个细胞，然后在适宜的培养条件下，让这些细胞生长和增殖。 动物体 组织 单个细胞 细胞生长和增殖 取出 分散 适宜条件 动物细胞培养所需的基本条件 营养条件 其他条件 无菌、无毒的环境 适宜的温度、pH和渗透压 适宜的气体环境 糖类、氨基酸、无机盐、维生素…… 营养 将细胞所需的营养物质按照种类和所需量严格配制而成的培养基，称为合成培养基 使用合成培养基时，（因为对细胞所需的营养物质尚未全部研究清楚）通常需要加入血清等天然成分 培养动物细胞一般使用液体培养基，也叫培养液 无菌、无毒的环境 无菌操作 定期更换培养液清除代谢物，防止细胞代谢物积累对细胞自身造成危害 温度、pH和渗透压 温度多36.5±0.5℃（哺乳动物） pH 7.2～7.4 气体环境 O2是细胞代谢必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。 通常将培养皿或松盖培养瓶置于95%空气＋5%CO2的混合气体CO2培养箱中培养。 一、动物细胞培养的概念 二、动物细胞培养的过程 三、干细胞 动物细胞培养 在从动物体取出的成块组织中，细胞与细胞靠在一起，彼此限制了生长和增殖。因此，在进行细胞培养时，首先要对新鲜取材的动物组织进行处理，或用机械的方法，或用_____、_____等处理一段时间，将组织分散成_____。然后，用培养液将细胞制成细胞悬液，再将细胞悬液放入培养皿或培养瓶内，置于适宜环境中培养。 胰蛋白酶 胶原蛋白酶 单个细胞 细胞贴壁现象 形成一层细胞 可形成多层细胞 胚胎或幼龄动物的组织块 胰蛋白酶（胶原蛋白酶） 剪碎 单细胞悬液 原代培养 传代培养 单细胞悬液 消化 细胞贴壁 接触抑制 消化 稀释分瓶 放入CO2培养箱中培养 取动物组织 传代培养 制备细胞悬液 原代培养 转入培养液中 放入CO2培养箱中培养 分瓶培养 离心、收集细胞 细胞贴壁 接触抑制 思考1、为什么选用胚胎或幼龄动物的组织块？ 分析：胚胎或幼龄动物的组织细胞_____。 思考2、贴附性细胞有什么特点？ 分析：存在_____和_____现象。 思考3：为什么要进行传代培养，一次传代中细胞分裂几次？ 分析：动物组织消化后经过初次培养已经贴满瓶壁，出现_____，细胞不再_____。一次传代培养，细胞分裂3到5次就又会出现接触抑制，需要用_____消化后才能继续传代培养。 分裂能力强，容易培养 细胞贴壁 接触抑制 接触抑制 分裂 胰蛋白酶 思考4、进行动物细胞传代培养时用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行吗？胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？ 分析：用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是_____。多数动物细胞培养的适宜pH为7.2—7.4，胃蛋白酶在此环境中_____，而胰蛋白酶在此环境中活性较高，因此胰蛋白酶适宜用于细胞培养时的消化，但也不宜处理时间_____。 蛋白质 没有活性 太长 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 培养基性质 培养基特有成分 培养结果 培养目的 细胞的全能性 细胞增殖 固体培养基 液体培养基 蔗糖、植物激素 葡萄糖、动物血清 植物体 大量动物细胞 快速繁殖、培育无病毒植株 获得细胞或细胞分泌蛋白 相同点：培养基中都需要加入营 ... ...
