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课件网) 3.3.1 重组DNA技术的基本工具 一、限制酶 二、DNA连接酶 三、运载体（质粒、标记基因） DNA重组技术的基本工具 汉水丑生作品 （QQ:70939118） 四、单酶切和双酶切 磷酸酯键 基因工程是在DNA上进行的_____水平的设计施工，需要有专门的工具。 分子 限制性内切核酸酶（简称_____） 限制酶 限制酶主要是从原核生物中分离纯化出来的。限制酶是细胞的一种防御性工具。当原核细胞遭到外源DNA入侵时，它会利用限制酶来切割外源DNA，使之失效。 EcoRⅠ 属名Escherichia首字母 种名coli前两个字母 R型菌株 从中分离的第一个限制酶 限制酶的专一性体现在：一种限制酶能够识别双链DNA分子的_____，并且使每一条链中特定部位的两个_____之间的_____断开。 大肠杆菌中的一种叫做EcoR I的限制酶，能够专一识别DNA中的_____序列，并在G和A之间将这段序列切开（实质是在_____与14_____之间切断磷酸二酯键）。 特定核苷酸序列 核苷酸 磷酸二酯键 GAATTC 鸟嘌呤脱氧核苷酸 腺嘌呤脱氧核苷酸 基因的“剪刀” （5 ′）黏性末端 5′ 5′ 平末端 5′ 3′ 5′ 3′ 中心轴线 EcoRⅠ 5′ 3′ 5′ 3′ SmaⅠ 基因的“剪刀” SmaI能够专一识别DNA中的_____序列，并在_____之间将这段序列切开（实质是在鸟嘌呤脱氧核苷酸与胞嘧啶脱氧核苷酸之间切断磷酸二酯键）。 当限制酶在它识别序列的_____将DNA的两条链分别切开时，产生的是_____末端，而当限制酶在它识别序列的_____切开时，产生的则是平末端。EcoRI切割DNA产生_____末端，SmaI切割DNA产生_____末端。 GGGCCC G和C 中心轴线两侧 黏性 中心轴线处 黏性 平 基因的“剪刀” 同尾酶 限制酶的识别序列通常为6个核苷酸，也有的为4个核苷酸或8个核苷酸 一、限制酶 二、DNA连接酶 三、运载体（质粒、标记基因） DNA重组技术的基本工具 汉水丑生作品 （QQ:70939118） 四、单酶切和双酶切 现有来自两种生物的DNA片段1和DNA片段2，用同一种限制酶处理后，DNA片段1和2带有_____的黏性末端。在一个混合体系中，DNA片段1和2随机碰撞在一起时，黏性末端之间会自发形成_____，但不同DNA片段骨架上的缺口无法自动连接。 DNA连接酶的作用是：将双链DNA片段“缝合”起来，恢复被_____切开的两个_____之间的_____。 相同 氢键 限制酶 核苷酸 磷酸二酯键 基因的“针线” 类型 E·coli DNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 _____ _____ 功能 只缝合_____ 缝合_____和_____ 结果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的_____ 大肠杆菌 T4噬菌体 黏性末端 黏性末端 平末端 磷酸二酯键 5′ 5′ 5′ 5′ 3′ 3′ 5′ 5′ T4 DNA连接酶 E.coli DNA连接酶 类型 E·coli DNA连接酶 T4DNA连接酶 来源 _____ _____ 功能 只缝合_____ 缝合_____和_____ 结果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的_____ 大肠杆菌 T4噬菌体 黏性末端 黏性末端 平末端 磷酸二酯键 3′ 3′ 5′ 5′ 5′ 5′ 5′ 5′ T4 DNA连接酶 DNA连接酶的作用示意图 DNA聚合酶的作用示意图 同尾酶 练习1、已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—GGATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是———GATC—。 （1）则能被限制酶I切割的DNA，_____（能/不能）被限制酶II切割； （2）能被限制酶II切割的DNA，_____（能/不能/不一定能）被限制酶I切割。 （3）DNA1被限制酶I切割，DNA2被限制酶II切割，加入DNA连接酶可得到DNA1和DNA2的重组DNA片段，该重组DNA片段_____（能/不能/不一定能）被限制酶I切割， _____（能/不能/不一定能）被限制酶II切割。 能 不一定能 能 不一定 练习1、已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—GGATCC—，限制酶Ⅱ的识别序列和切点是———GATC—。 （3）DNA1被限制酶I切割，DNA1被限制酶II切割，加入DNA连接 ... ...
