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课件网) 欲培育地上长番茄和地下结马铃薯的“超级作物”。你有什么好妙招？ 利用传统有性杂交方法能实现吗？为什么？ 不能。因为不同种生物之间存在着生殖隔离 第一节 体液调节是通过化学信号实现的调节 第一节 体液调节是通过化学信号实现的调节 第二章 植物细胞工程 第二节 神经系统通过下丘脑控制内分泌系统 第二节 神经系统通过下丘脑控制内分泌系统 第二节 通过体细胞杂交可获得新的植物体 1．原生质体优势：没有细胞壁的阻碍，更容易被转入外源基因，是植物基因工程的理想受体。同时，没有了坚硬致密的细胞壁的阻碍，植物细胞之间的融合得以实现。 2．原生质体应用及意义：标志着植物细胞工程技术又向前迈进了一步，为植物细胞工程和基因工程的研究提供了先进的实验体系，具有重要的理论研究和实际应用价值。 一、成功培养原生质体是植物体细胞杂交技术的基础 原生质体的概念：植物细胞除去细胞壁后的部分。（呈球形） 二 ① ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ 杂种细胞 去除细胞壁 去除细胞壁 诱导融合 细胞壁再生 脱分化 再分化 移栽 ①制备原生质体：酶解法去壁 1.无菌条件下，在超净工作台上分别取已消毒的番茄、马铃薯叶片 2.加入含0.5～0.6mol/L甘露醇（或一定浓度蔗糖）溶液环境（较高渗透压）下 3.用经过G6玻璃砂漏斗过滤灭菌的纤维素酶和果胶酶混合液处理叶片 使细胞处于微弱的质壁分离状态，这样有利于完整的原生质体的释放，防止原生质体被破坏。 1.用酶解法制备原生质体时，影响原生质体的数量和活力的因素有哪些？ 分离和纯化的大致方法： ①用滤网过滤混合液，去除大的残渣，收集滤液，滤液进行离心，通过转速的控制将原生质体沉淀而细胞碎片等杂质仍然悬浮在上清液为主。经离心后，原生质体沉降于管底，上部为含碎片的混合液 ②弃去含杂质的上清液，重新悬浮原生质体，再次离心。重复3次。 ③用原生质体培养基洗涤一次，收集管底纯净的原生质体。 材料的种类和生理状态；酶的种类、酶解时间和温度；酶液的浓度；分离与纯化的方法等。 2.检测原生质体活力的方法有哪些？ 拓展不做要求：测定原生质体的活性方法： 1.番红染液染色法：用0.1%番红进行染色后即进行观察，有活力而质膜完整的原生质体对染料有排斥作用而不被染色，死亡的原生质体能立即被染上色。 2.荧光素双醋酸酯（FDA）染色法：FDA本身无荧光，无极性，能自由出入完整的细胞膜。当FDA进入活细胞后，由于受到酯酶分解而产生具有荧光的极性物质荧光素。荧光素是一种极性化合物，它很难穿透细胞膜，便积聚在细胞质内，在蓝色激发光下，荧光素发出黄绿色的荧光。 有活力的细胞能产生荧光，无活力的原生质体不能分解FDA，无荧光产生 3.渗透吸水或失水法： 4.观察胞质环流 5.形态识别法：原生质体呈绿色（若来源于叶片）及圆而鼓者为活原生质体。 2.检测原生质体活力的方法有哪些？ 染色法、渗透吸水或失水法 二 ① ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ 过 程 杂种细胞 去除细胞壁 去除细胞壁 诱导融合 脱分化 再分化 移栽 植物体细胞杂交 ②诱导原生质体的融合 物理方法：电刺激、离心、震荡 化学方法：聚乙二醇 二 ① ① ② ③ ④ ⑤ ⑥ 过 程 杂种细胞 去除细胞壁 去除细胞壁 诱导融合 再生细胞壁 再分化 移栽 植物体细胞杂交 ③适宜条件下培养，再生细胞壁 原生质体培养时的培养基渗透压应低于原生质体制备时的渗透压。 原生质体培养时，其再生出细胞壁是其能进行有丝分裂的前提。 如何检测细胞壁的再生？ 置于适宜浓度的高渗溶液中观察是否发生质壁分离 思考：若只考虑原生质体的两两融合，诱导融合后只出现杂种细胞吗？如何将杂种细胞培育成杂种植株？ 番茄细胞原生质体 马铃薯细胞原生质体 电激或PEG 未融合的 ... ...
