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课件网) 第一节 体液调节是通过化学信号实现的调节 第一章 发酵工程 第二节 神经系统通过下丘脑控制内分泌系统 第二节 神经系统通过下丘脑控制内分泌系统 第二节 纯净的目标微生物可通过 分离和纯化获得 一、采用划线或涂布的接种方法能够实现对目标微生物的分离和纯化 1.单菌落：在固体培养基上通过接种、培养获得的由一个细胞分裂形成的、肉眼可见的、有一定形态构造的子细胞集团。 在固体培养基表面形成单菌落，可以用于菌种的分离、鉴定和纯化。 2．单菌落获取方法： 意义： 单菌落的分离是消除杂菌污染的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一. 单菌落分离或接种的方法：通过平板划线法和稀释涂布平板法等方法获得单菌落 （1）平板划线法： 原理 ：接种环划线的过程中，菌液被逐渐稀释，最终出现单个细菌，培养后形成单菌落。 方法：通常用接种环蘸取液体 培养物或挑取固体表面的微生物 后，在固体培养基表面进行连续 平行划线、扇形划线或其他形式 的划线，以实现接种的目的。 平板划线操作中三种灼烧的目的不同 1.蘸取菌液前灼烧 2.每次划线前灼烧 3.划线操作结束后灼烧 避免接种环上可能存在的微生物污染菌种。 杀死残留菌种，保证每次划线接种环上的菌种直接来源于上一次划线的末端。 及时杀死接种环上残留的菌种，避免菌种污染环境和感染操作者。 能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 用接种环蘸菌液____次，在固体培养基表面划线，下一次划线应从上一次划线的_____开始。每次划线前接种环要 ，聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。在数次划线后培养，可以在划线的末端出现不连续的 。若共划线五次，接种环要烧灼____次。另外：每次划线都不能与之前的线条_____；不能将最后一次划线与第一次划线相连；不能_____培养基。培养基需 后，放入培养箱培养。 划破 重叠 6 末端 1 灭菌 单菌落 倒置 注意：1.无论是何种划线法，蘸取菌种前和划线后，接种环都要灼烧灭菌。 2.无论是何种划线法，菌种只蘸取一次。 思考 1 2 3 4 5 （1）灼烧接种之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种。 (2）划线时最后一区域不要与第一区域相连。 (3)划线用力要大小适当，防止用力过大划破培养基 (4)每次实验：划3个平板（重复实验）1个不接种（空白对照） 划线注意事项 （2）稀释涂布平板法 a.原理 ：用无菌水将菌液进行一系列的梯度稀释，在适当的稀释度下，可培养得到相互分开的单菌落。 b.过程： 稀释菌液 （10-5 ~ 10-7倍） 涂布 培养 用移液管吸取1ml细菌培养液加入另一个盛有9ml无菌水的试管中，混合均匀，以此制成10-1倍的稀释液，依次方法得到10-5 ~ 10-7倍稀释液。 在培养皿侧面或底面做好标记后,用移液管取0.1ml稀释度不同的菌液，加在培养皿的固体培养基上。再将涂布器放在酒精灯火焰上灼烧，待涂布器冷却后，在酒精灯旁打开培养皿，将菌液涂布到整个平面上。 将培养皿倒置，在37℃恒温箱中培养24~48h。 这样在稀释度适当的固体培养基表面也能得到单个细胞生长繁殖成的单菌落。根据菌落的形状，大小、颜色、边缘或表面光滑与否等特征可以选取目标微生物继续培养。 分离、计数微生物———稀释涂布平板法 例：将1g土样加到盛有99ml无菌水的三角瓶中，如图进行稀释，每个稀释度涂布三个平板，根据结果计算1g土样中菌的数量？ 注意： 1.分离得到单菌落一般以培养皿中有20个以内菌落为宜。 2.计算微生物数量一般以培养皿中有30~300个菌落为宜。 （159+141+150）÷3×10×105 =1.5×108个/g 无法计数 159 17 2 0 无法计数 141 13 1 0 无法计数 150 11 3 1 9ml 无菌水 加入0.1ml稀释液（移液管） ... ...
