3.2基因工程的基本操作程序第二课时 (共25张PPT)-2025-2026学年人教版（2019）高中生物学选择性必修3

(课件网) 第2节 基因工程的基本操作程序 第2课时：步骤三、四 目的基因的筛选与获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 第一步 第二步 第三步 第四步 目的基因的检测与鉴定 基因工程的基本操作程序 自主学习：阅读课本相关内容（P81），总结将目的基因导入受体细胞的方法 有哪些，各个方法的原理是什么？各自适用于什么生物？ 总体把握 将目的基因导入受体细胞的方法，因为受体细胞的不同而有所区别。 导入方法： 导入植物细胞 导入动物细胞 导入微生物细胞 显微注射法 Ca2+ 处理法 花粉管通道法（我国科学家独创） 农杆菌转化法（常用） 三、将目的基因导入受体细胞 1.导入植物细胞———花粉管通道法（我国科学家独创的一种方法） 子房 花粉 柱头 花粉管 精子 卵细胞 胚囊 方法一：用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中； 方法二：在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊。 2.导入植物细胞———农杆菌转化法 （2）特点： ①农杆菌能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。 （1）转化的概念：指目的基因进入受体细胞内，并在受体细胞内稳定维持和表达的过程。 ②农杆菌细胞内含有的Ti质粒，能将Ti质粒上的T - DNA 转移至受体细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。 表现出新性状的植株 植物组织培养 第一次导入 第二次导入 第一次拼接 第二次拼接 将目的基因拼接到 Ti 质粒的 T-DNA上。 (非人工操作)是指含目的基因的 T-DNA 被拼接到受体细胞的染色体DNA上。 (非人工操作)含目的基因的 T-DNA 导入受体细胞。 将含目的基因的Ti质粒重新导入农杆菌。 Ti质粒 T—DNA 目的基因 构建基因表达载体 重组 Ti质粒 转入农杆菌 导入植物细胞 （3）过程： 2.导入植物细胞———农杆菌转化法 方法一：将新鲜的从叶片上取下的圆形小片与农杆菌共培养，然后筛选转化细胞，并再生成植株。 方法二：将花序直接浸没在含有农杆菌的溶液中一段时间，然后培养植株并获得种子，再进行筛选、鉴定等。 （4）农杆菌转化的具体方法： 体细胞 受精卵 受体细胞为？ 受体细胞为？ 2.导入植物细胞———农杆菌转化法 3.导入动物细胞———显微注射法 利用显微注射将目的基因注入动物生物的受精卵中，这个受精卵将发育成具有新性状的动物。 ———受体细胞是受精卵 思考： 为什么常选用受精卵作为受体细胞呢？ 1.体积大，易操作。 2.受精卵容易表现出全能性 4.导入微生物细胞———Ca2+处理法 （1）常用方法： Ca2+处理 目的： 可使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。 （3）过程： （2）受体细胞： 原核细胞（常选择大肠杆菌） 一般先用Ca2+处理大肠杆菌 使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态 再将重组的基因表达载体导入其中 Ca2+的作用：增加细胞壁的通透性 这种细胞称为感受态细胞 优点：繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少，易于培养。 实例：利用转基因大肠杆菌生产药物 注意：原核生物作为受体细胞产生的真核生物的蛋白质通常没有生物活性（无内质网和高尔基体加工），需要在体外进行再加工。 1.我国科学家独创的花粉管通道法，可以使目的基因借助花粉管通道进入受体细胞，是一种十分简便经济的方法，对此认识正确的是( ) A.不必构建表达载体就可以直接导入 B.此方法可用于转基因动物 C.受体细胞只能是植物的卵细胞 D.有时可以取代农杆菌转化法 D 都需要构建 只适用于植物 体细胞 【现学现用】 四、目的基因的检测与鉴定 Bt 基因 mRNA Bt 蛋白 抗虫棉 PCR等技术检测 抗原-抗体杂交技术 分子水平的检测 抗虫接种实验 个体生物学水平的 ... ...