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课件网) 第1节 重组 技术的基本工具 任务一 限制酶与连接酶 任务二 探究·实践的粗提取与 鉴定 一、基因工程的概念 1.手段：_____等技术。 2.目的：创造出更符合人们需要的新的_____和_____。 3.水平：_____水平。 转基因 生物类型 生物产品 分子 二、重组 技术的基本工具 1.限制性内切核酸酶(简称：限制酶)———分子手术刀” (1)来源:主要是从_____中分离纯化出来的。 ［注］限制酶作为一种防御工具，可切割外源 ，使之失效，以 保证原核生物的自身安全。 原核生物 (2)功能:能够识别双链 分子的_____,并且使每一条链 中特定部位的_____断开。大多数限制酶的识别序列由___个 核苷酸组成。 特定核苷酸序列 磷酸二酯键 6 (3)结果:产生_____。 黏性末端或平末端 2. 连接酶———分子缝合针” (1)作用:将_____“缝合”起来，恢复被限制酶切开的_____ _____。 (2)种类 双链片段 磷酸二酯键 种类 来源 作用特点 大肠杆菌 低于 3.基因进入受体细胞的载体———分子运输车” (1)作用:将外源基因_____细胞中。 送入 (2)种类 ①质粒:一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞细胞核或原核细胞 拟核 之外,并具有自我复制能力的_____。真正被 用作载体的质粒,都是在天然质粒的基础上进行过_____的。 环状双链分子 人工改造 ②_____、动植物病毒等。 噬菌体 (3)应具备的条件 ①质粒分子上有_____个限制酶切割位点,供外源 片段 (基因)插入其中。 ②能在细胞中进行_____或整合到受体上,随受体 同步 复制。 ③含有特殊的_____,便于_____的筛选。 ④载体对受体细胞应无毒害作用。 一个至多 自我复制 标记基因 重组分子 任务一 限制酶与 连接酶 【情境】 Ⅰ和 Ⅰ是两种限制酶，其识别序列及切割位点如下 表所示。 限制酶 识别序列及切割位点 _____ _____ (1)请画出 Ⅰ切割后产生的末端。 [答案] (2)Ⅰ和Ⅰ两种限制酶切割 分子形成的末端都是_____末 端，能连接具有该种末端片段的 连接酶有_____ _____。 黏性 连接酶和连接酶 (3)Ⅰ和Ⅰ切割后产生的黏性末端能否被 连接酶连接？说 出你的理由。 [答案] 能，二者切割后产生的黏性末端相同，可被 连接酶连接 (4)若某链状分子中含有两个Ⅰ的识别序列，该 分子将 被切成___个片段，共断裂___个磷酸二酯键。 3 4 (5)限制酶_____(填“能”或“不能”)切割原核细胞自身的 ，推测其 理由是_____ _____。 不能 原核细胞中不存在限制酶的识别序列或能被限制酶识别的序列被修饰了 基因工程中的同尾酶 这一类的限制酶来源各异，识别的靶序列也不相同，但产生相同的 黏性末端。由同尾酶产生的 片段，是能够通过其黏性末端之间 的互补作用彼此连接起来的。当把同尾酶切割的 片段与原来的 限制性内切核酸酶切割的 片段连接后，原来的酶切位点将不存 在，不能被原来的限制酶所识别。 例如:Ⅰ和 Ⅱ是同尾酶， Ⅰ的切割位点: Ⅱ的切割位点: 例1 [2024·山东菏泽一中月考] 如图是几种不同限制性内切核酸酶切 割 分子后形成的部分片段。下列叙述中正确的是( ) A.限制酶和 连接酶作用的部位都是磷酸二酯键 B.①～ 片段是由4种限制酶切割后产生的 C.①和④两个片段在聚合酶的作用下能形成重组 分子 D.②片段是在酶切位点为 的限制酶作用下形成的 √ [解析] 限制酶和 连接酶作用的部位都是磷酸二酯键，其中限制 酶能将磷酸二酯键切断，而连接酶能将 片段连接起来形成 磷酸二酯键，A正确；图中①④具有互补的黏性末端，因此可能是同 一种限制酶切割形成的，②③分别是由不同的限制酶切割产生的， 因此①～ 片段可能是由3种限制酶切割后产生的，B错误；由 于①④具有互补的黏性末端，所以应该用 连接酶连接起来，形 成重组 分子，C错误；由②片段的末端可推出，② ... ...
