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课件网) 第2课时 基因表达载体的构建 任务 基因表达载体的构建 基因表达载体的构建———转基因的核心工作 1.构建目的:使目的基因在_____，并且遗传给下一 代，同时使目的基因能够_____。 2.基因表达载体的组成:_____、目的基因、_____、_____ __等。 受体细胞中稳定存在 表达和发挥作用 启动子 终止子 标记基因 3.构建过程 用一定的_____切割载体，使它出现一个切口 用_____或_____的限制酶切割含有目的基因的 片段 利用_____将目的基因片段拼接到载体的切口处 限制酶 同种限制酶 能产生相同末端 连接酶 任务 基因表达载体的构建 【情境】 如图为一个基因表达载体的示意图。 (1)图中 表示的片段是_____,位于基因的 上游，是_____的部位， 驱动基因_____。 启动子 聚合酶识别和结合 转录出 (2)终止子使_____在需要的地方停下来，位 于基因的下游。启动子、终止子本质上是一 段_____片段。 转录 有特殊序列结构的片段 (3)标记基因的作用是_____ _____ _____。 鉴别受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来 (4)复制原点是 复制的起始位点。该片段 中_____碱基对较多，氢键数量相对较少， 不稳定， 容易解旋。 (5)目的基因要添加在_____之间才能被转录。 启动子和终止子 【资料】 阅读教材第80页“基因表达载体构建模式图”。 (1)构建基因表达载体时需要使用的工具酶为_____。 (2)切割目的基因和质粒的限制酶_____(填“一定”或“不一定”)相同， 但要确保切割后产生的末端_____(填“相同”或“不相同”)。 限制酶和连接酶 不一定 相同 (3)一般来说，构建基因表达载体时，常用两种不同的限制酶对质粒 和含目的基因的 进行切割，原因是如果用同种限制酶切割，会 导致_____等问题。 目的基因或质粒的自身环化、目的基因不能定向连接 例1 基因表达载体的构建是基因工程的核心步骤，是成功的关键， 下列相关说法不正确的是( ) A.构建基因表达载体的目的包括使目的基因在受体细胞中能稳定存 在且遗传给下一代 B.基因工程中使用的标记基因有许多种，有的标记基因是质粒上固 有的 C.一个基因表达载体一般包括目的基因、标记基因、起始密码子和 终止密码子等结构 D.基因表达载体中的复制原点是质粒 的复制的起点 √ [解析] 构建基因表达载体的目的是使目的基因在受体细胞中稳定存 在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作 用，A正确；质粒上的标记基因有的是其本身固有的，有的是人为加 上去的，B正确；一个基因表达载体一般包括目的基因、标记基因、 启动子和终止子等结构，C错误；基因表达载体中的复制原点是质粒 复制的起点，没有复制原点，质粒 就不能复制，D正确。 ［题后归纳］启动子、终止子、起始密码子、终止密码子的比较 启动子 终止子 起始密码子 终止密码子 位置 作用 启动转录 终止转录 翻译的起点 翻译的终点 例2 [2024·山东菏泽一中月考] 图甲为某种质粒简图，图乙表示某外 源上的目的基因，小箭头所指分别为限制性内切核酸酶 Ⅰ、 Ⅰ、Ⅲ、 Ⅰ的酶切位点。下列有关叙述错误的是( ) A.在基因工程中若只用一种限制酶完成对质粒和外源 的切割， 则可选 Ⅰ B.如果将一个外源分子和一个质粒分别用 Ⅰ酶切后，再用 连接酶连接，形成一个含有目的基因的重组，此重组 中 Ⅰ酶切位点有1个 C.为了防止目的基因自身环化，酶切时可使用Ⅰ和 Ⅲ两种 限制酶同时处理 D.一个如图甲所示的质粒分子经 Ⅰ切割后，含有2个游离的磷酸 基团 √ [解析] 目的基因两侧都有限制酶 Ⅰ的酶切位点，且质粒也含有限 制酶 Ⅰ的酶切位点，所以在基因工程中若只用一种限制酶完成对 图示质粒和外源的切割，可选 Ⅰ，A正确；如果将一个外源 分子和一 ... ...
