第四章 章末整合提升（课件 学案）高中生物学 浙科版（2019）选择性必修3 生物技术与工程

1.与DNA有关的几种酶的作用及特点 1.能催化DNA分子一条链上两个相邻的核苷酸形成磷酸二酯键的酶有（　　） ①DNA酶　②DNA连接酶　③DNA聚合酶 ④逆转录酶 A.①②③　　　　　　B.①③④ C.①②④ D.②③④ 2.基因工程中需使用多种工具酶，几种限制酶的切割位点如图所示。下列说法正确的是（　　） A.限制酶SmaⅠ和EcoRⅤ切割形成的末端，可以通过E.coli DNA连接酶相互连接 B.DNA连接酶、DNA聚合酶和RNA聚合酶均可催化磷酸二酯键的形成 C.限制酶EcoRⅠ进行一次切割，会切断2个磷酸二酯键，形成1个游离的5'末端 D.若两种限制酶的识别序列相同，则形成的末端一定能通过DNA连接酶相互连接 2.含有目的基因的受体细胞的筛选 （1）利用双标记基因和影印接种技术筛选含有目的基因的受体细胞 大肠杆菌pBR322质粒含有标记基因：氨苄青霉素抗性基因（ampr）和四环素抗性基因（tetr），外源DNA插在BamH Ⅰ位点处。将细菌涂布在含有氨苄青霉素（amp）的固体平板上进行第一轮筛选，未转化的则不能生长，转化成功的能长出菌落。上述转化成功的受体细胞有两种类型，即含重组质粒的细胞和含空载质粒的细胞。为了进一步区分这两类受体细胞，需要采用图示的方法进行第二轮筛选，由于外源DNA片段在BamH Ⅰ位点的重组导致质粒的tetr基因失活，含重组质粒的受体细胞呈amprtets表型（上标“r”代表抗性；“s”代表敏感）；而含空载质粒的受体细胞则为amprtetr表型。因此，含重组质粒的受体细胞只能在amp平板上生长，含空载质粒的受体细胞可出现在同时含amp和tet的平板上。 （2）利用蓝白斑显色法筛选含有目的基因的受体细胞 很多大肠杆菌的质粒上含有LacZ标记基因，其表达的β-半乳糖苷酶可将一种无色的化合物（X-gal）分解成蓝色物质，使菌落呈现蓝色。重组DNA技术常用的大肠杆菌质粒pUC18同时携带ampr和LacZ两个标记基因，外源DNA插在LacZ标记基因内部的任何限制酶切割位点处。将细菌涂布在同时含有amp和X-gal的固体培养基上，在长出来的菌落中，蓝色菌落的为含空载质粒的受体细胞，白色菌落的为含重组质粒的受体细胞。 3.大肠杆菌的质粒上含有lacZ基因，其编码的产物β-半乳糖苷酶在X-gal和IPTG同时存在时，可以产生蓝色沉淀，使菌落呈现蓝色，否则菌落呈现白色。如图为利用该质粒进行的转基因过程，请据图判断菌落①②③的颜色分别是（　　） A.蓝色　白色　白色　B.蓝色　蓝色　白色 C.蓝色　白色　蓝色 D.白色　蓝色　白色 4.大肠杆菌pUC118质粒是基因工程中常用的一种载体，具有氨苄青霉素抗性基因，该质粒中某限制酶的唯一切点位于lacZ基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ基因被破坏，则菌落呈白色。关于图中操作的说法正确的是（　　） A.试管1中应加入限制酶处理 B.试管2中用Ca2＋处理，将重组载体导入不含lacZ基因的大肠杆菌中 C.若大肠杆菌的菌落为蓝色，则质粒未导入大肠杆菌 D.培养基中除必需的营养物质外，还应加入适量卡那霉素 3.CRISPR/Cas9基因编辑技术 （1）构成：向导RNA＋限制性内切核酸酶Cas9。 （2）原理：向导RNA能与基因组DNA中特定碱基序列通过碱基互补配对结合在一起，引导Cas9到特定的基因位点进行切割；通过设计向导RNA中的20个碱基的识别序列，可人为选择DNA上的目标位点进行切割。 （3）功能：能简单、准确地进行基因定点编辑。 5.CRISPR/Cas9系统主要由向导RNA（SgRNA）和Cas9蛋白两部分组成，SgRNA可引导Cas9蛋白到特定基因位点进行切割，其机制如图所示。下列说法正确的是（　　） A.SgRNA通过碱基互补配对原则识别目标DNA分子，Cas9蛋白的功能与DNA连接酶相似 B.若要利用CRISPR/Cas9技术将一个基因从目标DNA分子上去除，通常需设计两个序列不同的SgRNA C.CRISPR/C ... ...