3.2基因工程的基本操作程序（第2课时） 课件(共29张PPT)-2025-2026学年高二下学期《生物》（人教版）选必修 3

(课件网) 第2课时：步骤三、四 第一章 第2节 基因工程的基本操作程序 目的基因的筛选与获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 第一步 第二步 第三步 第四步 目的基因的检测与鉴定 基因工程的基本操作程序 自主学习：阅读课本相关内容（P81），总结将目的基因导入受体细胞的方法 有哪些，各个方法的原理是什么？各自适用于什么生物？ 前情回顾 将目的基因导入受体细胞的方法 将目的基因导入 植物细胞 将目的基因导入 动物细胞 将目的基因导入 微生物细胞 农杆菌转化法 花粉管通道法 ———Ca2+转化法 病毒介导法 显微注射法 （1）花粉管通道法（我国科学家独创） 方法2：在植物受粉后的一定时间内，剪去柱头，将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊。 方法1：用微量注射器将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中 目的基因 目的基因 适用生物：开花植物 1.目的基因导入植物细胞 （2）农杆菌转化法 转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。实质是基因重组。 1.目的基因导入植物细胞 农杆菌能在自然条件下侵染双子叶植物和裸子植物，而对大多数单子叶植物没有侵染能力。 （可转移的DNA） 关于农杆菌 农杆菌细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的T-DNA转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。 目的基因 Ti质粒 表 达 载 体 农杆菌 植物细胞 植物细胞 染色体DNA 新性状植株 构建 转入 导入 插入 表达 （2）农杆菌转化法 1.目的基因导入植物细胞 合作学习：阅读课本P81内容，写出农杆菌转化法的思路 （1）导入方法： （2）受体细胞: 显微注射法 2.将目的基因导入动物细胞 受精卵 为什么常选用受精卵作为受体细胞呢？ ①体积大，易操作。 ②易表现出全能性。 （3）过程： 构建基因表达载体并提纯 利用显微注射将基因表达载体注入动物的受精卵中 早期胚胎培养 胚胎移植 获得具有新性状的动物 科学家也用病毒DNA与目的基因一起构建的载体，去感染受体动物细胞，也能使目的基因导入动物细胞内。如用腺病毒载体，搭载新冠病毒S基因，进入人体内，使人体产生对S蛋白的免疫记忆。 知识拓展 病毒介导法（主要用于导入动物细胞） 2.将目的基因导入动物细胞 （1）常用方法： Ca2+处理 原核细胞（常选择大肠杆菌） 目的：可使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态。 （2）受体细胞： 优点：繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少，易于培养。 3.目的基因导入微生物细胞 Ca2+ 感受态细胞 吸收 种类 项目 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 受体细胞 转化 过程 目的基因插入Ti质粒的T DNA上→导入植物细胞→整合到受体细胞的染色体DNA中→表达 目的基因表达载体提纯→取卵（受精卵）→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2＋处理细胞→能吸收周围环境中DNA分子的生理状态细胞→重组的基因表达载体导入细胞中 农杆菌转化法 显微注射法 Ca2＋处理法 体细胞或受精卵 受精卵 原核细胞 1.农杆菌转化法中两次拼接、两次导入的辨析 (1)两次拼接：第一次拼接是将目的基因拼接到Ti质粒的T－DNA上；第二次拼接(非人工操作)指被插入目的基因的T－DNA拼接到受体细胞染色体的DNA上。 (2)两次导入：第一次导入是将含目的基因的重组Ti质粒导入农杆菌；第二次导入(非人工操作)是指含目的基因的T－DNA导入受体细胞。 核心归纳 核心探讨 将目的基因导入受体细胞 下面为利用农杆菌转化法制备转基因植物的过程图，据图回答下列问题： 1.重组Ti质粒的构建需要哪些酶的作用？ 限制酶、DNA连接酶。 2.将基因表达载体导入农杆菌细胞时，应怎样处理农杆菌细胞？ 要用Ca2＋处理农杆菌细 ... ...