(
课件网) 微生物的选择培养和计数 发酵工程 01 稀释涂布平板法 稀释涂布平板法 1×10 90mL无菌水 2 铲取土样，将样品装入纸袋中。 将10g土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶，充分摇匀 1 2 取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中 梯度稀释 涂布平板 01 稀释涂布平板法 2 取1mL上清液加入盛有9mL无菌水的试管中，依次等比稀释。 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 1mL 稀释过程是否有可能污染？ 吹吸3次充分混匀 稀释涂布平板法 01 稀释涂布平板法 01 待涂布的菌液被培养基吸收后,将平板倒置,放入30~37℃的恒温培养箱中培养1~2d。在涂有合适浓度菌液的平板上就可以观察到分离的单菌落 培养： 7 稀释涂布平板法 01 稀释涂布平板法 03 微生物的数量测定 方法1 稀释涂布平板计数法计数 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。 一般选择菌落数在30-300的平板进行记数。 统计的菌落数往往比活菌的实际数目低？ 同一稀释度下，至少对3个平板进行重复计数，然后求平均值。 ★原理： ★原则： 减小实验误差 ★注意： 当两个或多个细胞连在一起，平板上观察到的只是一个菌落。 03 微生物的数量测定 方法2 显微镜直接计数法 快速、直观，能观察微生物的形态特征。 ★特点： 不能区分死菌和活菌，统计结果一般是活菌数和死菌数的总和 03 微生物的数量测定 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 提出问题 ①如何分离土壤中能分解尿素的细菌？ ②如何计算每克土壤样品中有多少分解尿素的细菌？ 尿素[CO(NH2)2]含氮量高，化学性质相对稳定，是现代农业生产中一种重要的氮肥。尿素施入土壤后，会被土壤中的某些细菌分解成NH3，NH3再转化为NO3-、NH4+等被植物吸收。而这些细菌之所以能分解尿素为，是因为它们能合成脲酶，脲酶催化尿素分解产生NH3，NH3可以为细菌生长的氮源。 资料补充 CO(NH2)2 + H2O CO2 + 2NH3 脲酶 转化 NH4+ NO3- 1. 将土壤稀释液中能分解尿素的细菌分离出来，培养基的配方该如何设计？ 以尿素作为唯一氮源，只允许以尿素作为氮源的微生物生长，培养基的其他营养成分与普通培养基基本相同。 选择培养基 允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类的微生物生长的培养基。 温度 提供70~80℃的培养温度 筛选出水生栖热菌 营养 筛选出石油分解菌 只提供石油为唯一碳源 营养 筛选出纤维素分解菌 只提供纤维素为唯一碳源 pH 选出耐高pH的细菌 提供高pH的生存环境 氧气 筛选出厌氧细菌 不提供氧气的生存环境 ①投其所好 ②取其所抗 选择培养基 稀释涂布平板法 单菌落 + → 03 微生物的数量测定 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 利用尿素作为唯一氮源的选择培养基，可以从土壤中分离出分解尿素的细菌。 组分 含量 KH2PO4 1.4g Na2HPO4 2.1g MgSO4·7H2O 0.2g 葡萄糖 10.0g 尿素 1.0g 琼脂 15.0g H2O 定容至1000mL 提供无机盐 提供碳源 提供氮源 提供水分 03 微生物的数量测定 实验设计 1.土壤取样 ①要求：富含有机质、酸碱度接近中性的潮湿土壤 取样时一般要铲去表层土 城市：公园里、街道旁、花盆中 农村：农田里、菜园里 ②取样土层：距地表3~8cm的土壤层 2.配置培养基 以尿素为唯一氮源的培养基 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 03 微生物的数量测定 实验设计 4.涂布平板 3.样品的稀释 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 细菌： 104、105、106 放线菌：103、104 、105 真菌：102、103、104 稀释倍数 03 微生物的数量测定 实验设计 4.涂布平板 稀释倍数 1×106 1×107 1×104 1×105 无菌水 选择培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 对照 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 ... ...
