苏教版高中生物选修一1.2《分离特定的微生物并测定其数量》实验课件 （共29张PPT）

课件29张PPT。第二节 分离特定的微生物并测定其数量1．掌握涂抹平板法或混合平板法。 2．掌握利用选择培养基分离特定微生物的方法。 3．观察各种微生物形成的菌落。微生物种类多样，也有多种代谢类型。根瘤菌，为固氮菌，可固定空气中的氮气假单孢杆菌，可以分解石油的超级细菌。尿素是一种重要的农业氮肥，人类和其他哺乳动物的尿中都含有尿素，大量尿素的存在会对环境造成污染。 既然微生物有多种代谢类型，那么有没有能降解尿素的微生物呢？今天我们就试试能不能从土壤中分离出以尿素为氮源的微生物。1、实例：DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（93 ℃）的DNA聚合酶。原因：因为热泉温度70～80 ℃，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等； 方法：⑴抑制大多数微生物不能生长；⑵造成有利于该菌生长的环境。 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。2、实验室中微生物的筛选原理： 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。3、培养基选择分解尿素的微生物的原理1、显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察；缺点2、间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法。每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。计数法直接计数法 平板计数法 比浊法 膜过滤法1、哪些土壤中含有这种以尿素为氮源微生物多？2、此实验用到的选择培养基需含有哪些物质？3、可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物对尿素分解能力的高低？没硬化，腐殖质丰富的土壤碳源、尿素、无机盐、水、酚红培养基红色的深浅5、用稀释涂布平板法计数时，菌落数在30-300（20以内）计数。重复性原则对照原则做一系列浓度梯度实验，探究合适的稀释度6、实验设计要遵循的原则：4、统计微生物的数量可用哪些方法？稀释涂布平板法，显微镜直接记数法 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。 取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。“微生物的天然培养基”数量最大、种类最多大约70%—90%是细菌1个50ml无菌水 2个4.5ml无菌水得10-2 10-3, 10-4的菌悬液0.5g土壤制备选择培养基（尿素为唯一氮源） 制备牛肉膏蛋白胨培养基（对照作用）思考？为什么还要制备牛肉膏蛋白胨培养基？◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中每一步都要在火焰旁进行◆分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因：不同微生物在土壤中含量不同 目的：保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？测定土壤中细菌的总量和测定土壤中能分解尿素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？ 原因：土壤中各类微生物的数量（单位：株/kg）是不同的。例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。 结论：为获得不同类型的微生物，就需要按不同的稀释度进行分离，同时还应当有针对性地提供选择培养的条件。取0.1ml ... ...