选修一 生物技术实践 第一讲 微生物的利用 考纲解读 知识内容 考试属性及要求 加试 微生物的培养和利用 大肠杆菌的培养和分离 实验与探究能力 分离以尿素为氮源的微生物 实验与探究能力 基础知识 考点一 微生物的实验室培养 一、培养基 1.培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。 2.成分：一般都含有碳源、氮源、水和无机盐，还需要适宜的PH、温度及特殊营养物质、氧气，以满足微生物生长的要求。 3.牛肉膏蛋白胨固体培养基的配置流程：计算→称量→熔化→灭菌→倒平板 4.培养基的种类及作用： 划分 标准 培养基种类 特点 用途 按物理性质分 液体培养基 不加凝固剂 工业生产、扩大培养 半固体培养基 加凝固剂，如琼脂 运动、保藏菌种 固体培养基 分离、鉴定、计数 按成分来源分 天然培养基 化学成分是天然物质 工业生产 合成培养基 将所需化学成分按需要和比例配制而成 分类、鉴定 按用 途分 选择培养基 抑制不需要的微生物生长，促进所需微生物生长 如培养基中加青霉素，可选出酵母菌、霉菌等真菌，而细菌则不能生长 鉴定培养基 加入某种化学物质或显色剂，鉴别不同种类的微生物 如培养基中加伊红美蓝试剂，可鉴别饮用水等食品中是否有大肠杆菌，若有，则菌落呈深紫色，带金属光泽 二、细菌的分离方法 1. 划线分离法 （1）方法：用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线过程中菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少。划线到最后，可使细菌间的距离加大。在培养10～20h后，可由一个细菌产生单菌落，菌落不会重叠。如果再将每个菌落分别接种至含有固体培养基的试管斜面上，在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是由一个细菌产生的后代。 （2）操作步骤：将培养皿底部用拇指和无名指固定成倾斜状态，在火焰旁将培养皿稍微打开。在此同时，用环状接种针在火焰旁取少许菌悬液，迅速送入培养皿内，在平板培养基的一边，作第1次平行划线 3～5条，转动培养皿约70°角，用烧过冷却的接种针，通过第1次划线部分作第2次平行划线，然后再用同样方法，通过第二次平行划线部分作第三次平行划线和通过第三次平行划线部分作第四次平行划线。划线时，接种针应与平板表面成30°角左右。不要使接种针碰到培养皿边缘，也不要将培养基划破。划线完毕后，盖上皿盖，倒置于恒温箱培养。 （3）操作注意事项 ①取菌种前，灼烧接种环的目的是消灭接种环上的微生物； ②除第一次划线外，其余划线前都要灼烧接种环的目的是消灭接种环上残留菌种； ③取菌种和划线前都要求接种环冷却后进行，其目的是防止高温杀死菌种； ④最后灼烧接种环的目的是防止细菌污染环境和操作者。 2. 涂布分离法：先将培养的菌液稀释，通常稀释到10－5 ～10－7之间，然后取0.1ml不同稀释度的稀释菌液放在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。通常每个培养皿有20个以内的单菌落最为适合。将每个菌落分别接种在斜面上扩增培养后，再做功能性实验。 3.比较：划线分离法，方法简单；涂布分离法，单菌落更易分开，但操作复杂些。 三、无菌技术 1．无菌技术：为避免外来杂菌的污染，应注意： ①对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒； ②将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌； ③为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰旁进行； ④避免已灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。 2．消毒方法： ①煮沸消毒法：日常生活常用方法； ②巴氏消毒法（80℃，煮15分钟）：对一些不耐高温的液体； ③化学药剂消毒：实验操作者的双手使用酒精进行化学消毒； ④紫外线消毒法：对接种室、接种箱或超净工作台等实验空间。 3．灭菌方法： ①灼烧灭菌法： ... ...
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