【微课第七期】选修3专题2：2.2 .1动物细胞培养和动物核移植技术（老久讲生物-28张ppt）课件

专题2 细胞工程 2.2动物细胞工程 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术 一、动物细胞培养 1、动物细胞培养的概念 : 是从动物机体中取出相关细胞，将它分散成单个细胞，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 进行动物细胞培养的原理：细胞增殖 动物细胞培养 是其他动物细胞工程技术的基础。 2 .动物细胞培养过程 胚胎或幼龄动物的组织器官 剪碎 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 细胞悬液 适宜条件下培养 条件： 1.无菌无毒 2.富含营养 3.温度，pH适宜 4.适宜的气体环境 思考1 为什么选择胚胎或幼龄动物的组织器官作为培养细胞的来源？ 胚胎或幼龄动物的细胞比老龄动物的组织细胞增殖能力强，有丝分裂旺盛。分化程度越低，繁殖能力越强，越容易培养。 思考2 胰蛋白酶或胶原蛋白酶有什么作用？为什么不用胃蛋白酶？ 利用酶的专一性，水解掉将细胞联系起来的具有一定弹性和韧性的纤维蛋白；使细胞分散。 动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（1.5）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 思考3 动物细胞培养液中有哪些成分保证细胞正常生长繁殖？如何保证无菌无毒环境？ 动物细胞培养液成分：糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。+ 血清（天然成分，激素） 无菌无毒： 1.培养前对液体培养基高压灭菌 2.加抗生素，抑菌 3.定期更换培养液，保证营养，去除代谢产物 4.培养环境无菌无毒。 思考4 1.培养动物细胞需要怎样的外界环境？ 温度与pH: 温度:36.5+/-0.5℃。 pH:7.2-7.4 气体环境：细胞培养需要气体O2和CO2。 用来培养动物细胞的CO2培养箱中气体组成： 95%的空气和5%的CO2。 CO2的作用是调节pH 原则：体外培养细胞尽量模拟体内生活环境。 3.动物细胞培养的特点 贴壁生长 选择有光滑内壁的培养瓶培养 细胞进行体外培养时，分散贴壁生长的细胞一旦相互汇合接触，即停止移动和生长。 接触抑制（正常细胞） 接触抑制消失（癌细胞） 随着接触抑制消失，细胞多层排布，形成肿瘤。 3. 原代培养和传代培养 胚胎或幼龄动物的组织器官 （出现接触抑制） 动物细胞培养液 胰蛋白酶再次水解 胰蛋白酶或胶原蛋白酶 细胞悬液 分装1次 原代培养 传代培养 概念: 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。 （细胞来源：剪碎分解后的动物组织） 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 （细胞来源：原代培养产生的细胞） 注：1.分装一次即传代一次 2.传代的次数和细胞分裂次数无关联 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 4.动物细胞培养的结果 传代10代以内，核型稳定，分裂较快。 传代10-50代，核型逐渐变化，分裂放缓，趋于衰老死亡。 突破50代，细胞具备了无限增殖的能力即癌细胞。 4.动物细胞培养的意义 1.获得生物制品 如病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等 2.作为基因工程中的受体细胞 3.作为动物体细胞核移植技术中的供核细胞。 4.检测有毒物质，筛选抗癌药物等 植物组织培养和动物细胞培养的比较 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 细胞的全能性 细胞增殖 培养基性质 固体培养基 液体培养基 培养基特有成分 蔗糖 植物激素 葡萄糖 动物血清 培养结果 植物体 细胞群体 培养目的 快速繁殖、培育无病毒植株等 获得细胞或细胞分泌蛋白等 二.动物细胞核移植技术和克隆动物 1、动物细胞核移植概念及分类 概念：将动物的一个细胞的 ，移入一个已经去掉细胞核的 中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体。 细胞核 卵母细胞 原理：动物细胞核的全能性 用胚胎细胞克隆的猴 用体细胞克隆的猪 分 类 胚胎细胞核移植 体细胞核移植 胚胎细胞分化程度低，恢复全能型相对容易 体细 ... ...