课件23张PPT。 第2节 基因工程及其应用绿色荧光蛋白被誉为“二十一世纪显微镜”2008年度诺贝尔化学奖授予日裔美国科学家下村修、美国科学家Martin Chalfie，以及美国华裔科学家钱永健(钱学森堂侄)。他们三人在发现绿色荧光蛋白方面作出突出成就。绿色荧光蛋白用紫外线一照就发出鲜艳的绿光，它可以帮助研究人员观察先前肉眼无法看到的细胞体系工作过程，例如脑神经细胞的发展或者癌症细胞是如何扩散的，将绿色荧光蛋白基因植入动物、细菌或其他细胞的遗传信息之中，让其随着这些需要跟踪的细胞复制，可“照亮”不断长大的癌症肿瘤、观察有害细菌的生长荧光蝌蚪大脑彩虹图一、基因工程 （基因拼接技术或DNA重组技术。）1.概念： 按照人们的意愿， 把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造， 然后放到另一种生物的细胞里， 定向地改造生物的遗传性状， 水母（发出绿色荧光）绿色荧光基因重组质粒 (重组DNA分子)猫的受精卵 （含绿色荧光基因）猫（不能发出绿色荧光） 绿色荧光猫提取（剪切）运输工具 结合（拼接）导入例：转基因荧光猫的培育过程二、基因工程步骤简介一、提取目的基因基因1基因2读书交流思考：如何单独取出基因2？需要的工具是什么？该工具有什么特点？“切下”目的基因实际上是破坏了什么化学键？1.基因的“剪刀”———限制性核酸内切酶(简称限制酶)来源:主要存在于微生物特点:一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并在特定的切点上切割DNA分子作用：断开磷酸二酯键限制酶（EcoRⅠ）作用过程被同一种限制酶切断的DNA分子是否具有相同的黏性末端？切下一个目的基因需要断开几个磷酸二酯键？2、基因的运输工具———运载体可以做为运载体的有： 质粒，噬菌体，动植物病毒都有侵染或进入宿主细胞的能力存在于许多细菌和酵母菌等生物的细胞中,是拟核或细胞核外能够自主复制的很小的环状DNA分子。与复制有关的DNA序列，称为“复制原点”与抗性有关的基因，称为“标记基因”，在基因工程后期操作中用于筛选质粒要将目的基因与质粒连接在一起，需要将质粒切开,思考，如何选择限制酶质粒酶X切点酶Y 切点酶M切点酶Z 切点酶N切点选择酶X，酶Y酶X 切点启动子： 调控转录开始终止子： 调控转录结束进一步修饰改造DNA 连接酶A许多A、B混合在一起，想想会有什么效果？B目的基因抗性基因终止子启动子复制原点二、构建表达载体三、导入受体细胞1、导入动物细胞：导入受精卵中显微注射法2、导入植物细胞：导入受精卵中或体细胞中花粉管1）花粉管通道法2）基因枪法手持式基因枪台式 基因枪3）农杆菌转化法3、导入细菌细胞中：向生长细菌的培养基中加入Cacl2,细菌会加强对周围大分子的吸收，这种状态称为感受态。感受态法四、目的基因的检测与表达青霉素抗性基因不抗青霉素的细菌想一想：如何检测基因转入成功？如何操作？向培养基细菌的培养基中加入青霉素，观察菌落生长状况1 、抗性基因筛选法2 、DNA分子杂交法用DNA探针检测目的基因以及目的基因表达的mRNA用有荧光标记的抗体检测是否有蛋白质产物3、抗原--抗体杂交法用病原体或害虫感染4、直接观察，或通过其他方式（如感染法）判断是否有相应的性状出现小结基因工程工具原理步骤 ... ...
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