课件27张PPT。 课题1 菊花的组织培养学习目标 熟悉植物组织培养的基本过程。 理解细胞分化、脱分化及再分化概念。 课题重点与难点 课题重点：植物组织培养的基本过程。 课题难点：植物组织培养过程中使用的无菌技术。细胞分化，脱分化，再分化。细胞分化： 个体发育中，细胞在形态、结构和 生理功能上出现稳定性差异的过程。特定时空下基因的选择性表达。形成各种组织器官。③结果：②原因：①定义：？什么是细胞分化？细胞分化的原因和结果？一、基础知识(一)植物的组织培养的基本过程2.脱分化、再分化？愈伤组织（形成的？特点？）②愈伤组织是通过细胞分裂形成的，其细胞排列疏松而无规则，高度液泡化呈无定形状态的薄壁细胞。①脱分化：由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。③再分化：脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官，这个过程叫再分化。2.植物组织培养的理论基础： 细胞全能性：具有某种生物全套遗传信息的任何一个活细胞，都具有发育成完整个体的能力，即每个生物细胞都具有全能性。 细胞全能性表达条件：2.一定的营养物质、激素和其他外界条件1.外植体：从活植物体上切下进行培养的那部分组织或器官二、植物组织培养的基本过程 离体器官、组织或细胞 脱分化 愈伤组织 再分化丛芽、根 植物体 三、影响植物组织培养的因素? 不同植物的组织培养难度不同 同一种植物的不同组织培养难度不同 大量元素：N、P、K、Ca、Mg、S 微量元素：B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、Co 有机物：甘氨酸、烟酸、肌醇、维生素、蔗糖等 植物激素：生长素、细胞分裂素、赤霉素等1、外植体的选取2、培养基的配制(MS培养基) 菊花组织培养应注意的问题？讨论：你能说出各种营养物质的作用吗？同专题2中微生物培养基的配方相比，MS培养基的配方有哪些明显的不同？答：微量元素和大量元素提供植物细胞生活所必需的无机盐； 蔗糖提供碳源，同时能够维持细胞的渗透压； 甘氨酸、维生素等物质主要是为了满足离体植物细胞对特殊营养的需求。 微生物培养基以有机营养为主。与微生物的培养不同，MS培养基则需提供大量无机营养。 3、不同植物激素浓度，使用顺序和使用量4、消毒 在培养的整个过程中，都需要是一个无菌环境原因：5、pH、温度、光照 菊花： pH=5.8 温度控制在18—22℃ 每日光照12h活动： 用自己的话把菊花组织培养的操作流程给描述出来?（提示：怎样配制MS培养基?外植体消毒应如何进行?接种、培养、移栽时应注意什么问题? ）制备MS固体培养基外植体消毒 接种 培 养栽 培四、实验操作 移 栽冲洗—酒精—无菌水冲洗—氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上二、实验操作（一）制备MS固体培养基MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用4。C保存配制好的培养基母液来制备1、配置各种母液①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量2、配置培养基①定容② 调PH③培养基的分装 3、灭菌分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝（二）外植体消毒2、消毒①流水冲洗菊花茎段用流水冲洗后可加少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右② 酒精处理—无菌水冲洗 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗 ③氯化汞—无菌水冲洗至少三次之上取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出后在无菌水中至少清洗3次，漂净消毒液（三）接种1、接种室消毒2、无菌操作要求操作要 ... ...
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