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课件网) (一)实验目标 初步掌握鉴定生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质的基本方法。 (二)实验原理 根据还原糖、脂肪和蛋白质与某些化学试剂产生特定的颜色反应，对生物组织中还原糖、脂肪、蛋白质进行鉴定。 1、还原糖的鉴定原理 生物组织中普遍存在的糖种类较多，常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖和蔗糖。前三种糖的分子内都含有游离的具有还原性的半缩醛羟基，因此叫做还原糖；蔗糖的分子内没有游离的半缩醛羟基，因此叫做非还原糖，不具有还原性。实际上本实验中，用用斐林试剂只能检验生物组织中还原糖存在与否，而不能鉴定非还原糖。 斐林试剂由质量浓度为0. 1 g／mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0．05 g／mL的硫酸铜溶液配制而成，两者混合后，立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2与加入的葡萄糖在加热的条件下，能够生成砖红色的Cu2O沉淀，而葡萄糖本身氧化成葡萄糖酸。其反应式如下： CH2OH一(CHOH)4一CHO+2Cu(OH)2→CH2OH一(CHOH)4一COOH+Cu2O↓+2H2O 用斐林试剂鉴定还原糖时，溶液的颜色变化过程为：浅蓝色→棕色→砖红色(沉淀)。 2．脂肪的鉴定原理 鉴定生物组织中是否含有脂肪时，可用苏丹Ⅲ染液或苏丹Ⅳ染液。因为苏丹Ⅲ染液可将脂肪染成橘黄色，苏丹Ⅳ染液可将脂肪染成红色。 3．蛋白质的鉴定原理 鉴定生物组织中是否含有蛋白质时，常用双缩脲法，使用的是双缩脲试剂。双缩脲试剂的成分是质量浓度为0．1 g／mL的氢氧化钠溶液和质量浓度为0．01 g／mL的硫酸铜溶液。在碱性溶液(NaOH)中，双缩脲(H2NOC—NH—CONH2)能与Cu2+作用，形成紫色或紫红色的络合物，这个反应叫双缩脲反应。由于蛋白质分子中含有很多与双缩脲结构相似的肽键，因此，蛋白质都可与双缩脲试剂发生颜色反应，从而用来鉴定蛋白质的存在。 (三)材料用具 1．实验材料 (1)鉴定还原糖的实验材料准备：植物组织是常用的实验材料，但必须加以选择。在双子叶植物中，光合作用的主要产物葡萄糖形成后合成为淀粉，暂时贮藏在叶片中，因此最好不用双子叶植物的叶片做实验材料。有些单子叶植物，如韭菜、鸢尾，并不将光合作用的初始产物转变为淀粉，因此叶片中含有大量的还原糖。但是，由于叶片中叶绿素的颜色较深，对于鉴定时的颜色反应起着掩盖作用，导致实验现象不明显，因此，也不宜用单子叶植物的叶片做实验材料。 本实验最理想的实验材料是含糖量较高的生物组织(或器官)，而且组织的颜色较浅，或近于白色的，如苹果和梨的果实。经试验比较，颜色反应的明显程度，依次为苹果、梨、白色甘蓝叶、白萝卜。 (2)鉴定脂肪的实验材料准备：实验材料最好选择富含脂肪的种子，如花生种子(取其子叶)：供实验用的花生种子，必须提前浸泡3～4 h。浸泡时间短了，不容易切成片；浸泡时间过长，则组织太软，切下的薄片不易成形。 (3)鉴定蛋白质的实验材料准备：实验材料最好选用富含蛋白质的生物组织(或器官)，植物材料常用的是大豆，动物材料常用的是鸡蛋(蛋白)。如用大豆，必须提前浸泡l～2 d，这样容易研磨成浆。 2．仪器和试剂 (1)仪器：剪刀，解剖刀，双面刀片，试管，试管架，试管夹，大小烧杯，小量筒，滴管，玻璃漏斗，酒精灯，三角架，石棉网，火柴，研钵，石英砂，纱布，载玻片，盖玻片，毛笔，吸水纸，显微镜。 (2)试剂：斐林试剂，苏丹Ⅲ染液，双缩脲试剂，体积分数为50％的酒精溶液，蒸馏水。 (四)方法步骤 1．还原糖的鉴定 (1)制备生物组织样液 (3)结论 该溶液颜色变成砖红色，这说明组织样液中的还原糖与斐林试剂发生了反应，从而鉴定苹果组织中有还原糖存在。 示例14通常情况下，正常人的尿液中没有葡萄糖。当一次食用大量糖时，尿液中是否有葡萄糖存在 下面利用对照实验的方法来设计实验方案进行 ... ...
