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课件网) 课题1 DNA的粗提取与鉴定 学习目标 1)通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质。 2）概述DNA的粗提取和鉴定的原理。 3）通过对DNA的粗提取实验过程的设计及操作，锻炼科学的思维方法，培养实事求是的科学态度。 学习重点：DNA的物理化学性质。 学习难点：粗提取的DNA的除杂。 实验思路 1）DNA应从哪提取？ 2）怎样将DNA与细胞中的其他物质分离？ 3）怎样鉴定提取物是否为DNA？ ⑴ DNA的溶解性 当NaCl浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最小，浓度为2mol/L时，DNA的溶解度最大。 利用这一原理，可以使DNA在盐溶液中溶解或析出。 DNA的特性 2mol/L DNA不溶于酒精 细胞中某些蛋白质溶于酒精 ⑵ DNA不溶于酒精溶液 将DNA与蛋白质进一步分离 （提纯） DNA的特性 ⑶ DNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性 ① 蛋白酶———水解蛋白质 对DNA没有影响 ② 高 温———大多数蛋白质不能忍受60～80℃ 的高温 而DNA在80℃以上才会变性 ③ 洗涤剂———瓦解细胞膜，去除脂质和蛋白质 但对DNA没有影响 DNA的特性 ⑷ DNA的鉴定 沸水浴 蓝色反应 DNA + 二苯胺 DNA的特性 （一）实验材料的选取 讨论： 什么样的实验材料更适合提取DNA? 实验设计 洋葱 鸡血 哺乳动物的红细胞 香蕉 DNA含量相对较高、材料易得 （二）破碎细胞，获取含DNA的滤液 讨论： 1）动物细胞如何破碎?其原理是？ 2）破碎植物细胞时，加入洗涤剂和食盐的作用是？ 3）此步骤获得的滤液可能含有哪些细胞成分？ 实验设计 蒸馏水涨破，渗透作用 洗涤剂：瓦解细胞膜 食盐：溶解DNA DNA、蛋白质、多糖、RNA等 （三）去除滤液中的杂质 讨论： 1）滤液中的杂质主要是？ 2）为什么反复地溶解与析出DNA， 能够去除杂质？ 3）方案二与方案三的原理有什么不同？ 实验设计 蛋白质 方案二：蛋白酶分解蛋白质，不分解DNA； 方案三：DNA耐高温而蛋白质不耐高温。 用高盐浓度的溶液溶解DNA，能除去在高盐中不能溶解的杂质；用低盐浓度使DNA析出，能除去溶解在低盐溶液中的杂质。因此，通过反复溶解与析出DNA，就能够除去与DNA溶解度不同的多种杂质。 （四）DNA的析出与鉴定 思考： 1）如何从滤液中析出DNA？ 2）纯的DNA应该是什么颜色？ 3）如何鉴定DNA分子？应注意什么？ 实验设计 白色丝状物 用二苯胺试剂，沸水浴；做空白对照实验。 利用冷酒精 实验操作 制备鸡血细胞液…………加柠檬酸钠，静置或离心 破碎细胞，释放DNA… 加蒸馏水，同方向快速搅拌，过滤 ↓ ↓→破坏细胞膜、核膜等。 去除杂质……… ①加入2mol/L NaCl，同方向缓慢搅拌，过滤 ② 加蒸馏水至NaCl 浓度为0.14mol/L，同方向缓慢搅 拌，析出DNA，过滤 ③将粘稠物溶解到2mol/L NaCl溶液中，同方向缓慢 搅拌，过滤 →除去细胞质中的大部分杂质。 DNA析出……… 与等体积95％冷酒精混合，同方向缓慢搅拌，析出 白色丝状物 →除去核蛋白等。 DNA鉴定……… 加入2mol/L NaCl溶液，搅拌。再加入二苯胺，沸水浴 以鸡血为例 实验小结 1）共有“四次过滤，两次析出， 六次搅拌” 2）加入“两次蒸馏水，三次NaCl 溶液，一次酒精” 实验展示 加入洗涤剂和食盐，充分搅拌、研磨 以香蕉为实验材料，提取DNA 实验展示 香蕉的DNA鉴定结果 香蕉DNA 对照组 实验展示 以洋葱为实验材料，提取DNA DNA断裂， 无法形成絮状沉淀 实验展示 香蕉、洋葱的DNA鉴定结果对比 香蕉DNA 洋葱DNA 对照组 课堂巩固 1.下列哪项不宜选作DNA提取材料的是( ) A.洋葱表皮细胞 B.鲜豌豆种子 C.人的成熟红细胞 D.猪肝 2.实验中NaCl的物质的量浓度为2mol/L和0.14mol/L，分别对DNA有何影响? 前者是溶解DNA，过滤除去不溶的杂质 后者是使DNA析出，过滤除去滤液中的杂质 C 课堂巩固 3. ... ...
